大黃素納米乳的制備及體外抗大腸癌 Caco-2細(xì)胞的研究.pdf

1、　　目的：制備大黃素納米乳,進(jìn)行工藝優(yōu)化和質(zhì)量評價(jià)；體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)探討其對大腸癌 Caco-2 細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。
　　方法：
　　(1)采用低能法制備納米乳。非離子型表面活性劑選擇聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40)、吐溫 80(Tween80)、司盤 80(Span80),助表面活性劑選擇無水乙醇、甘油、正丁醇、PEG400,油相選擇 IPM、橄欖油、金龍魚食用調(diào)和油。采用偽三元相圖對處方進(jìn)行初步篩選,星

2、點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化制備工藝,對空白乳基本性質(zhì)進(jìn)行考察。
　　(2)制備含藥納米乳,建立大黃素高效液相含量測定方法,對大黃素納米乳的基本性質(zhì)進(jìn)行考察。
　　(3)將含藥納米乳作用于人大腸癌細(xì)胞株 Caco-2,MTT 法測定對大腸癌細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測對細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)根據(jù)篩選結(jié)果,吐溫 80(Tween80)為表面活性劑、甘油為助表面活性劑、油 相 為

3、 肉 豆 蔻 酸 異 丙 酯 (IPM)、 水 相 為 水 , 表 面 活 性 劑 和 油 相 比 例(S/O)8：1、表面活性劑和助表面活性劑的比值(Km)4：1、表面活性劑和水相的比值 0.20,最優(yōu)處方組成 IPM：Tween80：甘油：水為 5：32：8：200。空白納米乳平均粒徑為 9.86±1.23 nm。高速離心試驗(yàn)表明,納米乳經(jīng) 6000 rpm, 30 min,無分層和絮凝；室溫放置 3 個(gè)月保持澄清透明,納米乳無分層

4、和絮凝。大黃素納米乳為球形,分布均勻,粒徑在 1~100 nm 之間,平均粒徑 9.92±2.28 nm。納米乳經(jīng) 6000 rpm 高速離心 30 min,無分層；室溫放置 3 個(gè)月保持澄清透明,納米乳無分層和絮凝。(2)采用反相高效液相法測定大黃素含量,色譜柱：Waters C18 柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80：20)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波 長 ：2

5、54 nm 。 回 歸 方 程 ： Y=5.1×109X-2.4×105 , 大 黃 素 在2.1×10-7mg~1.05×10-6mg 內(nèi)線性關(guān)系良好, r2=0.9992 ,平均回收率為98.6%, RSD 為 2.38,精密度試驗(yàn) RSD 為 1.84。測得三批大黃素納米中大黃素含量分別為 0.58mg/mL,0.59mg/mL,0.57mg/mL。(3)大黃素 40μg/mL 組、大黃素納米乳 20μL 組作用 Caco-2 細(xì)