無血清懸浮培養(yǎng)法富集人胃癌SGC-7901干細(xì)胞及干性鑒定的研究.pdf

1、目的：
　　探討無血清懸浮培養(yǎng)法富集人胃癌SGC-7901懸浮細(xì)胞球的可行性，摸索其最佳成球條件；對所獲取的成球細(xì)胞進行干性鑒定。
　　方法：
　　1．采用無血清懸浮培養(yǎng)法在含補充因子干細(xì)胞培養(yǎng)基及超低粘附環(huán)境中富集胃癌懸浮細(xì)胞球，通過補充因子種類和濃度的不同組合確定懸浮細(xì)胞球形成的最佳條件。
　　2．球體形成實驗檢測成球細(xì)胞的自我更新能力；集落形成實驗檢測成球細(xì)胞的克隆增殖能力；免疫熒光實驗檢測成球細(xì)胞的多向分

2、化能力；耐藥實驗檢測成球細(xì)胞對氟尿嘧啶的耐藥特性；裸鼠成瘤實驗檢測成球細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力；蛋白質(zhì)印跡法及流式細(xì)胞術(shù)檢測成球細(xì)胞中CD44及Oct4的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1．無血清含補充因子（EGF：20ng/ml、bFGF：10ng/ml、B27：2％、N-2：1%）干細(xì)胞培養(yǎng)基及超低粘附環(huán)境是人胃癌SGC-7901細(xì)胞懸浮成球的最佳條件，隨著傳代次數(shù)的增加，其成球速度加快，球體體積增大，立體鏡像明顯。
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3、．球體形成實驗結(jié)果顯示6代以后的成球細(xì)胞較母代SGC-7901細(xì)胞形成懸浮細(xì)胞球的效率更高（28.6%v s4.1%），集落形成實驗結(jié)果顯示成球細(xì)胞較母代SGC-7901細(xì)胞具有更強的克隆增殖能力（78.3%v s20.4%）；耐藥實驗結(jié)果顯示氟尿嘧啶對成球細(xì)胞的抑制率低于母代細(xì)胞（P＜0.05,RI=5.68）；裸鼠成瘤實驗結(jié)果顯示成球細(xì)胞較母代細(xì)胞致瘤時間短，成瘤體積大（3127mm3v s424mm3）。免疫熒光實驗結(jié)果顯示成球細(xì)

4、胞在加入血清后干性相關(guān)蛋白Oct4的表達(dá)下降，同時下降的還有膜蛋白CD44；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示干性相關(guān)蛋白Oct4及膜蛋白CD44在成球細(xì)胞中的表達(dá)率均顯著高于母代細(xì)胞（Oct4：96.03%vs4.69%;CD44：30.17%vs2.58%）。蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示Oct4及CD44的蛋白表達(dá)量在成球細(xì)胞中高于母代細(xì)胞（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．無血清含EGF（20ng/ml）、bF GF（10ng/ml）、N