腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中EGFR活化對(duì)上皮性卵巢癌惡性行為的影響及機(jī)制研究.pdf

1、上皮性卵巢癌（Epithelial Ovarian Cancer，EOC）是婦科腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，卵巢癌細(xì)胞在腹腔內(nèi)的廣泛侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后差的重要原因。微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophages，TAMs)在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用越來(lái)越受到重視。巨噬細(xì)胞具有可塑性，不同的環(huán)境中，可以分化為不同的亞群（如M1、 M2），不同亞群在分子表型及功能上存在顯著差異。TAMs表現(xiàn)為M2型，具

2、有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。
　　表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）活化在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。近來(lái)，巨噬細(xì)胞中EGF信號(hào)通路的作用也成為關(guān)注的熱點(diǎn)。為探討TAMs在上皮性卵巢癌進(jìn)展中的作用和活化TAMs中EGF/EGFR信號(hào)通路對(duì)上皮性卵巢癌惡性行為的影響及分子機(jī)制，本課題研究分為以下三個(gè)部分:
　　第一部分，分析TAMs的數(shù)量及比例與EOC患者臨床病理特征及

3、預(yù)后的關(guān)系。收集67例2007年1月至2008年12月期間在我院婦科腫瘤科診斷為EOC且腹水不少于200ml患者的臨床病理資料，采用免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)方法分析原發(fā)卵巢癌組織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例，統(tǒng)計(jì)分析上述指標(biāo)與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示:癌組織中CD163+TAMs的數(shù)量與組織分化程度、FIGO(International Federation of Gynaecology and Obstetr

4、ics)分期及患者對(duì)鉑類治療的反應(yīng)密切相關(guān);腹水中，TAMs的比例與FIGO分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腹水量、患者對(duì)化療及鉑類治療的反應(yīng)密切相關(guān);并且癌組織中TAMs數(shù)量是患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期及總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　第二部分，分析EGF在外周血單核細(xì)胞向TAMs分化中的作用。分離培養(yǎng)健康志愿者外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood monocytes，MOs)及EOC患者腹水中TAMs，比較EGF處理后的MOs與TA

5、Ms分子表型和分泌細(xì)胞因子的差異，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、MTT增殖實(shí)驗(yàn)及單層傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Wound healing assay)檢測(cè)不同處理后的條件培養(yǎng)基對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果表明:EGF在體外可誘導(dǎo)外周血來(lái)源單核細(xì)胞分化為M2型巨噬細(xì)胞樣TAMs，其分子表型和分泌型表現(xiàn)為CD163highlL-10highTGF-βhighlL-8high。EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的

6、侵襲、增殖及遷移。
　　第三部分，TAMs中EGFR活化促進(jìn)EOC惡性行為的機(jī)制研究。利用EGFR的單克隆抗體西妥昔單抗(Cetuximab)，PI3K抑制劑LY294002和ERK抑制劑PD98095檢測(cè)不同處理后TAMs分泌IL-10的變化。其次，通過(guò)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、MTT增殖實(shí)驗(yàn)及單層傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制TAMs培養(yǎng)上清中IL-10作用的條件培養(yǎng)基對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果顯示:24h

7、時(shí)，EGF（0.01μg/ml—1.0μg/ml）刺激TAMs分泌IL-10存在濃度依賴。在TAMs中，EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過(guò)其下游PI3K/AKT和ERK兩條信號(hào)通路促進(jìn)IL-10的分泌。并且，含有IL-10的TAMs培養(yǎng)上清液可能通過(guò)上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)水平促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲、增殖和遷移。
　　綜上所述，得出以下結(jié)論:
　　(1)原發(fā)EOC癌組

8、織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例與EOC的惡性程度密切相關(guān)，表達(dá)越高，提示患者的疾病惡性程度越高。
　　(2)EGF在體外可誘導(dǎo)外周血來(lái)源單核細(xì)胞分化為具有M2型巨噬細(xì)胞特征（CD163 highlL-10highTGF-βhighlL-8hi曲）的TAMs，并且EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲、增殖及遷移。
　　(3)EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過(guò)其下游PI3K/AKT和ERK兩條