紅松松子殼多糖的提取純化、組成分析及抗氧化活性研究.pdf

1、紅松(Pinus koraiensis)系松科松屬植物，在我國(guó)東北地區(qū)分布廣泛，松子殼是摘除松子后的松球鱗片，多被丟棄或焚燒?，F(xiàn)有研究表明紅松松子殼中的多糖(Pinus koraiensis Pinon Shell Polysaccharides，PPSP)具有抗腫瘤、抗病毒等多種活性，因此對(duì)該多糖成分進(jìn)行提取、分離純化以及生物活性研究具有重要意義。
　　本課題對(duì)紅松松子殼多糖的提取工藝優(yōu)化、膜分離聯(lián)用柱層析技術(shù)分離純化、抗氧化活

2、性測(cè)定、以及其單糖組成研究、結(jié)構(gòu)特征初步分析、含量測(cè)定方法改進(jìn)等多方面進(jìn)行了系列研究，主要內(nèi)容如下:
　　1、對(duì)多糖含量測(cè)定方法—DNS法（3，5二硝基水楊酸法）做出了重要改進(jìn)。DNS法具有許多突出優(yōu)點(diǎn)，然而對(duì)于是否選用供試液最大吸收波長(zhǎng)作為其測(cè)定波長(zhǎng)卻存在顯著分歧（反對(duì)采用最大吸收波長(zhǎng)者認(rèn)為在該波長(zhǎng)處測(cè)定時(shí)會(huì)出現(xiàn)顯色劑強(qiáng)吸收所帶來(lái)的嚴(yán)重干擾），本實(shí)驗(yàn)中對(duì)此進(jìn)行了探索性研究，并首次報(bào)道了有關(guān)該爭(zhēng)議的針對(duì)性評(píng)述和相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

3、
　　經(jīng)系列實(shí)驗(yàn)后得知，導(dǎo)致以上測(cè)定波長(zhǎng)爭(zhēng)議的根本原因并非波長(zhǎng)因素，其本質(zhì)在于空白溶液設(shè)計(jì)是否得當(dāng);上述顯色劑干擾是以蒸餾水為空白所致，選用顯色劑做空白即可有效排除，舍棄供試液最大吸收波長(zhǎng)而另選測(cè)定波長(zhǎng)既不必要，也容易增大分析誤差。本實(shí)驗(yàn)中的紅松松子殼多糖DNS法含量測(cè)定的適宜波長(zhǎng)為供試液最大吸收波長(zhǎng)500nm，同時(shí)必須以顯色劑做空白溶液，另選測(cè)定波長(zhǎng)或者改用蒸餾水為空白所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)明顯有誤。以上結(jié)果對(duì)于其它多糖或還原糖的DNS法

4、含量測(cè)定也可提供參考。
　　2、對(duì)紅松松子殼多糖的提取工藝進(jìn)行了條件優(yōu)化研究，以多糖產(chǎn)率為指標(biāo)，探索了提取時(shí)間、提取次數(shù)以及料液比等不同因素對(duì)提取效果的影響規(guī)律，此后又進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選出最佳提取工藝:料液比1∶15(g/ml)，提取時(shí)間2h，提取3次，各因素對(duì)紅松松子殼多糖產(chǎn)率影響的主次順序?yàn)?料液比＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間，在優(yōu)化工藝條件下多糖產(chǎn)率可達(dá)2.9％。
　　3、經(jīng)上述優(yōu)化工藝提取的紅松松子殼粗多糖，再經(jīng)吸附精制等

5、處理后，進(jìn)行膜分離純化，又經(jīng)木瓜蛋白酶結(jié)合Sevage法脫蛋白，D101大孔樹脂脫色后得到紅松松子殼總多糖，由此形成一條易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用的工藝路線。
　　本實(shí)驗(yàn)中還將膜分離技術(shù)與離子交換纖維素柱層析聯(lián)用，將上述紅松松子殼總多糖進(jìn)行分離后得到四個(gè)組分，分別命名為PPSPⅠ-1、PPSPⅠ-2、PPSPⅠ-3和PPSPⅠ-4，成功建立了對(duì)總多糖進(jìn)一步分離分級(jí)的制備方法。
　　4、對(duì)上述紅松松子殼總多糖及其純化組分進(jìn)行了單糖組成

6、研究和結(jié)構(gòu)特征初步分析。
　　氣相色譜結(jié)果表明:紅松松子殼總多糖PPSPⅠ-b是由鼠李糖、木糖等至少六種單糖組成的雜多糖，其摩爾比是:鼠李糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=3.40∶1.40∶0.79∶7.82∶10.67∶18.35;PPSPⅠ-1與PPSPⅠ-2皆是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等單糖組成的雜多糖，兩者摩爾比顯著不同;PPSPⅠ-4僅檢測(cè)出一種單糖—葡萄糖，以上四組樣品的GC譜圖中均有一個(gè)

7、色譜峰因缺乏相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品暫未鑒別歸屬，推測(cè)可能為其它單糖。
　　紅外光譜分析表明四種多糖純化組分(PPSPⅠ-1、PPSPⅠ-2、PPSPⅠ-3和PPSPⅠ-4)均具有糖類的特征吸收峰，各組分的單糖均為吡喃糖，其糖苷鍵構(gòu)型存有差異，PPSPⅠ-1與PPSPⅠ-2組分結(jié)構(gòu)中只存在α-構(gòu)型糖苷鍵;PPSPⅠ-3組分中既有α-構(gòu)型糖苷鍵又有β-構(gòu)型糖苷鍵;PPSPⅠ-4組分結(jié)構(gòu)中只存在β-構(gòu)型糖苷鍵。此外PPSPⅠ-2、PPSPⅠ-3和

8、PPSPⅠ-4均推測(cè)為酸性多糖，這與其在DEAE-52離子交換纖維素柱層析中的層析行為也相符合。
　　5、對(duì)來(lái)自不同制備過(guò)程的五種紅松松子殼多糖樣品PPSPⅠ、PPSPⅡ、PPSPⅠ-a、PPSPⅠ-b、PPSPⅠ-2進(jìn)行體外抗氧化活性研究，并且得到了富有明顯規(guī)律性的結(jié)果。
　　研究結(jié)果表明:該五種紅松松子殼多糖樣品均有一定的體外抗氧化活性，并發(fā)現(xiàn)該活性與其用量呈正相關(guān)。不同多糖組分對(duì)·OH和DPPH·具有相似的清除規(guī)律，清

9、除能力強(qiáng)弱依次為:Vc＞PPSPⅠ（膜分離所得總多糖）＞PPSPⅡ（醇沉法所得總多糖）＞PPSPⅠ-a（膜分離所得總多糖又脫蛋白）＞PPSPⅠ-b（膜分離所得總多糖又脫蛋白、脫色）＞PPSPⅠ-2(DEAE-52柱層析所得的多糖組分之一)。由此可知，膜分離所得總多糖PPSPⅠ抗氧化活性最強(qiáng)，脫蛋白后活性明顯減弱，再脫色后活性繼續(xù)下降，DEAE-52柱層析所得的多糖組分之一PPSPⅠ-2的活性，顯著弱于柱層析純化前的各樣品。
　　在