藍(lán)莓花青素提取、純化、成分鑒定及抗氧化活性的研究.pdf

1、藍(lán)莓，又稱越橘、藍(lán)漿果，基本營養(yǎng)成分為果糖、蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸、紫檀芪、超氧化物歧化酶等，富含花青素，在小腸中的吸收率高，具有降血糖、抗炎、抗腫瘤和增殖作用。貴州省麻江縣從2000年春開始引種藍(lán)莓，到2008年止，共引入藍(lán)莓4大類30個品種，其中，兔眼藍(lán)莓12個，北高叢藍(lán)莓10個，半高叢藍(lán)莓4個，南方高叢藍(lán)莓4個，并篩選出適宜的品種10個。但目前對貴州境內(nèi)的藍(lán)莓研究報道較少，本文以麻江產(chǎn)兔眼藍(lán)莓（品種：園藍(lán)）為研究對象，對其進(jìn)行花青素

2、的提取、純化工藝的研究，同時對所含花青素種類進(jìn)行鑒定，并對其體外抗氧化活性進(jìn)行測定。本文成果主要體現(xiàn)在：
　　1.采用超聲輔助溶劑提取工藝，設(shè)計單因素試驗考察不同酸化劑類型、酸化劑用量、超聲溫度、超聲時間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取次數(shù)，根據(jù)單因素試驗結(jié)果選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、鹽酸用量及超聲溫度這三個因素設(shè)計響應(yīng)面Box-Behnken試驗，優(yōu)化超聲提取藍(lán)莓花青素的提取工藝參數(shù)；后續(xù)純化考查了乙酸乙酯萃取、大孔樹脂吸附法純化藍(lán)莓花青素

3、提取物的效果。最終優(yōu)化后的提取條件為：超聲溫度40℃，鹽酸用量為0.3％（V/V），乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%，超聲時間20 min，1：6料液比提取3次，得提取物花青素187.92mg/100 g藍(lán)莓。純化條件：15 mL藍(lán)莓粗提濃縮液，加入30 mL去離子水混合后，加入30 mL乙酸乙酯，萃取4次，花青素質(zhì)量從粗提液187.92 mg/100 g減少至135.32 mg/100 g。樹脂純化實驗表明：AB-8樹脂吸附率、解吸率更高，當(dāng)吸附

4、時間大于1.5 h后，花青素吸附已達(dá)到平衡；0.3%（V/V）鹽酸酸化95%乙醇洗脫劑效果最好，最終70 mL洗脫劑就能將花青素洗脫完全，得到經(jīng)AB-8大孔樹脂純化后花青素含量為95.83 mg/100 g。
　　2.采用高效液相-質(zhì)譜（HPLC-ESI-MS/MS）聯(lián)用液相色譜（HPLC-PDA）鑒定并確認(rèn)了貴州省麻江縣種植的兔眼藍(lán)莓（品種：園藍(lán)）18個單體花青素，分別是：飛燕-3-半乳糖苷、飛燕-3-葡萄糖苷、矢車菊-3-半乳

5、糖苷、飛燕-3-阿拉伯糖苷、矢車菊-3-葡萄糖苷、矢車菊-3-阿拉伯糖苷、矮牽牛-3-葡萄糖苷、芍藥-3-半乳糖苷、矮牽牛-3-阿拉伯糖苷、芍藥-3-葡萄糖苷、錦葵-3-半乳糖苷、芍藥-3-阿拉伯糖苷、錦葵-3-葡萄糖苷、矢車菊素、錦葵-3-阿拉伯糖苷、矮牽牛素、芍藥素、錦葵素。兔眼藍(lán)莓中錦葵類占花青素總量36.93%，其次是矢車菊類占總量26.76%、飛燕類占總量16.69%，其中單體花青素含量最高為錦葵-3-葡萄糖苷15.86%。而

6、市售藍(lán)莓提取物（由上?；莩巧锟萍加邢薰咎峁┗ㄇ嗨胤N類僅為四種，分別是：矢車菊-3-葡萄糖苷、芍藥-3-葡萄糖苷、矢車菊素、芍藥素。
　　3.2,2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基，即DPPH?(λmax=515 nm)分光光度比色法測花青素(λmax=520 nm)抗氧活性時，反應(yīng)剩余色素干擾明顯，導(dǎo)致DPPH?的微弱的吸光度值變化難以讀出。引進(jìn)液相色譜法，根據(jù)花青素與DPPH·不同的保留時間，將其區(qū)別，避免了反應(yīng)剩余花青素的干擾，利

7、用DPPH·反應(yīng)前后的峰面積差即可算出DPPH?自由基清除率，提高了數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。最終，單體花青素抗氧化實驗中，自制藍(lán)莓花青素中矢車菊素、矮牽牛素、芍藥素、錦葵素完全反應(yīng)，飛燕-3-半乳糖苷、飛燕-3-葡萄糖苷、飛燕-3-阿拉伯糖苷，減少率分別為21.62、22.24、22.38%，其中矢車菊-3-葡萄糖苷面積減少率為4.04%?？寡趸钚宰顝姷幕ㄇ嗨貑误w分別為：矢車菊素、矮牽牛素、芍藥素、錦葵素、飛燕-3-半乳糖苷、飛燕-3-葡萄糖苷