菠蘿蜜烷型三萜化合物升麻醇逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用及機(jī)制研究.pdf

1、在腫瘤的臨床治療中,ABC家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥是惡性腫瘤患者化療失敗的主要原因。一直以來,通過抑制ABC家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥被認(rèn)為是克服腫瘤耐藥最有效的辦法。目前,第三代逆轉(zhuǎn)劑已進(jìn)入臨床研究階段,但是在藥效和毒性方面仍然面臨巨大的挑戰(zhàn)。迄今為止,還沒有耐藥逆轉(zhuǎn)劑上市。天然化合物結(jié)構(gòu)新穎、種類繁多,從中尋找和開發(fā)高效、低毒的新型耐藥逆轉(zhuǎn)劑藥物先導(dǎo)物是目前腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑研究的熱點(diǎn)。
　　升麻醇(acerinol)

2、是從傳統(tǒng)中藥小升麻(Cimicifuga acerina)中分離得到的菠蘿蜜烷型三萜化合物,尚未見升麻醇在抗腫瘤活性方面的報(bào)道。本課題主要對(duì)升麻醇進(jìn)行耐藥逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià)及其作用機(jī)制研究,為天然來源的新型腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究目的:
　　對(duì)升麻醇的腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性進(jìn)行評(píng)價(jià),并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行深入研究,為升麻醇發(fā)展成為靶點(diǎn)清楚、機(jī)制明確的新型腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究方法:

3、r>　　(1)升麻醇多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià):①采用MTT法評(píng)價(jià)升麻醇對(duì)HepG2、MCF-7及相應(yīng)的耐藥性HepG2/ADM和MCF-7/ADR細(xì)胞的增殖抑制作用。②MTT法評(píng)價(jià)升麻醇腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性。③使用 P450-GloTM screening systems試劑盒檢測升麻醇對(duì)CYP3A4酶活性的影響。
　　(2)升麻醇逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥機(jī)制研究:①采用MTT法檢測升麻醇對(duì)順鉑在腫瘤細(xì)胞上的毒性影響。②使用流式細(xì)胞術(shù)檢測升麻

4、醇對(duì)多柔比星在細(xì)胞中累積的影響。③使用流式細(xì)胞術(shù)檢測升麻醇對(duì)羅丹明-123在細(xì)胞中累積的影響。④采用RT-PCR法檢測升麻醇對(duì)HepG2/ADM和MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1 mRNA的影響。⑤采用Western blot法檢測升麻醇對(duì)ABCB1蛋白表達(dá)水平影響。⑥采用Western blot和MTT法檢測ABCB1 siRNA干擾對(duì)升麻醇逆轉(zhuǎn)作用的影響。⑦使用Pgp-GloTM ATPase試劑盒檢測升麻醇對(duì)ABCB1 ATPas

5、e活性的影響。⑧采用MTT法評(píng)價(jià)升麻醇逆轉(zhuǎn)作用的持續(xù)性。⑨應(yīng)用Docking分析方法模擬升麻醇和維拉帕米與ABCB1分子對(duì)接。
　　研究結(jié)果:
　　(1)升麻醇多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià):①升麻醇(4μM)對(duì) HepG2、HepG2/ADM、MCF-7及MCF-7/ADR細(xì)胞均沒有毒性,選用4μM和2μM作為研究濃度。②升麻醇可顯著提高多柔比星、長春新堿和紫杉醇對(duì)HepG2/ADM和MCF-7/ADR細(xì)胞的敏感度,且不影響抗腫瘤藥

6、物在HepG2和MCF-7上的毒性。③升麻醇對(duì)CYP3A4酶活性只有輕微影響。
　　(2)升麻醇逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用機(jī)制研究:①升麻醇對(duì)非ABCB1底物順鉑無明顯影響。②升麻醇可促進(jìn)抗腫瘤藥物多柔比星在 HepG2/ADM和MCF-7/ADR上的累積。③升麻醇顯著促進(jìn)ABCB1特異性底物羅丹明-123在耐藥細(xì)胞中的累積。④升麻醇對(duì)ABCB1在mRNA和蛋白表達(dá)水平無明顯影響。⑤ABCB1 siRNA干擾顯著降低升麻醇的耐藥逆轉(zhuǎn)作用