磁珠標(biāo)記法測(cè)定T618I突變型hERG鉀通道的電生理特征及其藥物反應(yīng)性.pdf

1、目的：
　　比較野生型和T618I突變型hERG鉀通道的電生理特性，并觀(guān)察T618I突變型hERG鉀通道對(duì)多非利特的藥物反應(yīng)性，以進(jìn)一步揭示短QT間期綜合征的發(fā)病基礎(chǔ)，為其臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　第一部分磁珠標(biāo)記法測(cè)定野生型hERG鉀通道電流
　　方法：
　　利用免疫磁珠陽(yáng)性標(biāo)記法制作hERG鉀通道表達(dá)系統(tǒng)，測(cè)定野生型hERG鉀通道的I-V曲線(xiàn)、穩(wěn)態(tài)激活曲線(xiàn)、穩(wěn)態(tài)失活曲線(xiàn)、滅活時(shí)間常數(shù)，評(píng)價(jià)該系統(tǒng)的應(yīng)用價(jià)值。

2、
　　結(jié)果：
　　采用35mm平皿，2ug質(zhì)粒，5ullipofectamine轉(zhuǎn)染試劑，在48-72h時(shí)細(xì)胞陽(yáng)性率可達(dá)10~20％。記錄野生型hERG鉀通道電流在20mV時(shí)出現(xiàn)內(nèi)向整流；穩(wěn)態(tài)激活曲線(xiàn)V1/2為-12.2±0.629mV，斜率（k）為11.8±0.587mV；穩(wěn)態(tài)失活曲線(xiàn)V1/2為-11.9±2.75mV，斜率（k）為19.0±1.75mV；滅活時(shí)間常數(shù)在10mV后隨電壓升高而降低；動(dòng)作電位鉗刺激時(shí)，當(dāng)電壓為

3、-40mV時(shí)電流達(dá)峰值。
　　結(jié)論：
　　1.細(xì)胞最佳的轉(zhuǎn)染配比為2ug質(zhì)粒，5ullipofectamine轉(zhuǎn)染試劑。
　　2.所記錄hERG鉀通道電流較典型，穩(wěn)態(tài)激活和穩(wěn)態(tài)失活均符合波爾茲曼方程。
　　3.滅活時(shí)間常數(shù)及動(dòng)作電位I-V曲線(xiàn)均顯示為典型的野生型hERG通道電流。
　　第二部分 T618I突變型hERG鉀通道的電生理特征及其藥物反應(yīng)性
　　方法：
　　利用免疫磁珠陽(yáng)性標(biāo)記表達(dá)系統(tǒng)

4、記錄T618I突變型hERG鉀通道電流，比較其與野生型電流的區(qū)別，揭示其導(dǎo)致心律失常的機(jī)制，觀(guān)察其對(duì)多非利特的藥物反應(yīng)性。
　　結(jié)果：
　　T618I突變型hERG鉀通道刺激電壓在60-70mV時(shí)出現(xiàn)不穩(wěn)定，在80mV以上出現(xiàn)明顯的內(nèi)向整流特性；當(dāng)刺激電位為-50mV~+50mV系列脈沖刺激時(shí)， T618I穩(wěn)態(tài)激活曲線(xiàn)與波爾茲曼方程擬合效果良好，V1/2為0.6623±1.167mV，斜率（k）為13.01938±1.208

5、mV；穩(wěn)態(tài)失活曲線(xiàn)不符合波爾茲曼方程；動(dòng)作電位鉗刺激的I-V曲線(xiàn)不對(duì)稱(chēng)，向左偏移；30nmol/L的Dofetilide可縮小突變型通道電流，使其內(nèi)向整流電壓左移。
　　結(jié)論：
　　1. T618I突變型hERG鉀通道電流的電流幅值較野生型大，且內(nèi)向整流電壓向正向移動(dòng)。
　　2.穩(wěn)態(tài)激活曲線(xiàn)在刺激電位為-50mV~+50mV時(shí)符合波爾茲曼方程，當(dāng)刺激電壓超過(guò)50mV時(shí)則不符合；穩(wěn)態(tài)失活不符合波爾茲曼方程
　　3.