姜黃素對(duì)Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠DRG神經(jīng)元TTX-R鈉電流的影響.pdf

1、目的：觀察腹腔注射姜黃素對(duì)Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(DNP)大鼠機(jī)械痛敏(MWT)、熱痛敏(TWL)以及背根神經(jīng)節(jié)(DRG)小直徑神經(jīng)元TTX-R鈉電流的影響。
　　 方法：雄性SD大鼠85只隨機(jī)分為正常組（N組，n=20）以及糖尿病組(M組，n=65)。M組大鼠經(jīng)高糖高脂飼料喂養(yǎng)(HFD)8周誘導(dǎo)胰島素抵抗后，繼以單次小劑量鏈脲佐菌素(STZ)35mg/kg腹腔注射，血糖≥16.7mmol/l者入選實(shí)驗(yàn)，成功建立Ⅱ型糖尿病大鼠

2、模型。14天后測(cè)M組大鼠MWT、TWL，降低至基礎(chǔ)值85％以下者入選為Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛組（D組，n=54）。將D組再次隨機(jī)分為3組(n=18):1)Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛（DNP組），給予普通飼料喂養(yǎng)，不作任何處理;2）Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛+姜黃素100mg/kg/d組（DCur組），高糖高脂飼料喂養(yǎng)，且腹腔注射姜黃素100mg/kg/d，持續(xù)14天;3)Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛+溶劑對(duì)照組（DSC組），高糖高脂飼料喂養(yǎng)，

3、且腹腔注射玉米油4 ml/kg/d，持續(xù)14天。另從N組隨機(jī)挑選18只作為正常對(duì)照組（Con組），給予普通飼料喂養(yǎng)，自始至終不作任何處理。所有組別在姜黃素治療3、7、14天后測(cè)MWT與TWL，并在同時(shí)間點(diǎn)各組隨機(jī)選取4只大鼠，急性分離大鼠L4-6 DRG神經(jīng)元，進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗記錄。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠血糖、胰島素濃度及胰島素敏感指數(shù)的變化:與N組相比，高糖高脂飼養(yǎng)8周后M組大鼠血糖水平明顯增高但未達(dá)到糖尿病診

4、斷標(biāo)準(zhǔn)（N組3.6±0.4 mmol/L，M組5.4±1.3mmol/l）(P＜0.05)，空腹胰島素濃度也明顯升高(N組13.37±3.89 mIU/L，M組16.88±4.47 mIU/L)(P＜0.05)，胰島素敏感指數(shù)明顯下降（N組-3.89±0.51，M組-4.51±1.59）（P＜0.05）。
　　 2.痛閾的變化:STZ注射前各組MWT(N組40.6±7.9g，M組40.9±6.5g)、TWL(N組13.37±2.

5、84s，M組13.73±2.54s)基礎(chǔ)值無差別(P＞0.05)。與N組相比，注射STZ14天后M組大鼠MWT降低、TWL縮短(P＜0.05)，且持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。姜黃素治療階段，與DNP組相比，Cur組給藥后7天后MWT與TWL即有明顯改善;且在給藥14天后變化更為明顯（P＜0.05）;DSC組和DNP組相比，給藥后各時(shí)間點(diǎn)MWT、TWL差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.DRG神經(jīng)元基本電生理特性的改變:1）全細(xì)胞電容(Cm)共有2

6、83個(gè)神經(jīng)元用于Cm的記錄(n=22～26)，其平均值為13.2±1.8 pF。且四組大鼠所取神經(jīng)元記錄的Cm值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.1）;2）靜息膜電位（RMP）共有252個(gè)神經(jīng)元成功記錄RMP(n=19～23)。給藥3天后，Con組RMP要明顯高于其他三組（Con組62.6±4.8mV、DNP組51.2±3.9mV、DCur組49.9±2.7mV、DSC組51.0±3.4mV）(P＜0.05);給藥7天后，DCur組RMP較DNP組

7、與DSC組明顯增高，并持續(xù)至給藥后14天，且DSC組和DNP組無顯著差異性。
　　 4.DRG神經(jīng)元總鈉電流大小的改變:共有233個(gè)神經(jīng)元用于總鈉電流的分析。給藥3天后，四組的峰值總鈉電流密度分別為:Con組69.0±7.0pA/pF(n=20)、DNP組124.9±8.6pA/pF(n=16)、DCur組118.8±8.0pA/pF(n=20)、DSC組122.0±8.4pA/pF(n=19)，其中來自于DNP大鼠的DRG神經(jīng)

8、元總鈉電流要明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。給藥7天后，DCur組總鈉電流密度較DNP組明顯下降(DNP組129.4±4.7pA/pF(n=16)、DCur組94.4±9.0pA/pF(n=20))（P＜0.05）;給藥14天后，DCur組的總鈉電流大小亦有顯著改善，且在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，DSC組和DNP組的總鈉電流密度無顯著差異性。
　　 5.DRG神經(jīng)元TTX-R鈉電流幅度及其電生理特性的改變:TTX-R鈉電流通過預(yù)脈沖從16

9、4個(gè)小直徑神經(jīng)元的總鈉電流中分離獲得。1）給藥3天后，四組的峰值TTX-R鈉電流密度分別為:Con組53.4±7.8pA/pF(n=12)、DNP組107.4±6.4pA/pF(n=13)、DCur組102.9±8.4pA/pF(n=15)、DSC組105.8±7.7pA/pF(n=15)，其電流幅度較總鈉電流降低，但是具有同樣的變化趨勢(shì)。給藥7天后，DCur組TTX-R鈉電流密度較DNP組亦有顯著下降(DNP組103.2±2.7pA/

10、pF(n=16)、DCur組70.1±5.4pA/pF(n=20))（P＜0.05）;給藥14天后，各組變化趨勢(shì)與給藥7天后相似，但兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的DCur組并無顯著性差異(P=0.242)。2）Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠DRG神經(jīng)元的Ⅰ-Ⅴ曲線較正常對(duì)照組顯著下移，但在水平方向并無顯著改變，但給藥7天及14天后，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的治療組Ⅰ-Ⅴ曲線有顯著升高;DNP組大鼠DRG神經(jīng)元的穩(wěn)態(tài)激活曲線較其他三組在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有顯著左移，并伴隨斜率因