柴胡皂甙d治療狼瘡性腎炎的實驗研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種由多種因素引起機(jī)體免疫失調(diào)產(chǎn)生一系列自身抗體所導(dǎo)致的多系統(tǒng)、多器官受累的自身免疫性疾病，多見于育齡期女性，預(yù)后較差，嚴(yán)重危害人類健康。狼瘡性腎炎(lupusnephritis，LN)是SLE最常見的臨床表現(xiàn)，腎臟病變程度直接影響sLE的預(yù)后，LN及進(jìn)行性腎功能損害是SLE的主要死亡原因之一。 LN的病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，這為本病的根治帶

2、來困難。近年大量臨床觀察與實驗資料證明細(xì)胞因子的異常在LN發(fā)病過程中起重要作用。這些細(xì)胞因子包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN—γ)、白細(xì)胞介素2、4、6、10、12、18(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18)等。 對LN的研究除了臨床資料外，還有賴于對幾種自發(fā)性狼瘡小鼠模型的研究。其中新西蘭黑色品系(NZB)與新西蘭白色品系(NZW)雜交的子一代

3、NZBWF1白發(fā)狼瘡腎炎小鼠病變類似于人類的LN，因此常被作為人類LN的實驗研究模型。 LN的治療一直是醫(yī)學(xué)上的一大難題。目前糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒藥物仍為治療的首選藥物，LN的預(yù)后得到了顯著的改善，但是患者病情常常反復(fù)，難以控制，且長期、大量應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒藥物，不可避免出現(xiàn)毒副作用。因此，發(fā)掘新藥、探索新的治療方法以提高LN患者的生存率和改善其生活質(zhì)量是目前亟待解決的問題。 中藥是我國醫(yī)學(xué)資源的一大寶庫，研究表明中

4、藥在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)方面具有較大的優(yōu)點(diǎn)，近些年來國內(nèi)一些學(xué)者對LN應(yīng)用中藥進(jìn)行了研究治療，結(jié)果顯示中藥對LN的治療在減少西藥毒副作用、降低復(fù)發(fā)率、提高療效等方面有很好的應(yīng)用前景。而如能應(yīng)用分子生物學(xué)方法，闡明中藥的作用機(jī)制，篩選有效藥物，必將使中醫(yī)藥治療LN的研究達(dá)到更高水平。 柴胡為常用中藥，柴胡皂甙d(Saikosaponin-d，SSd)是從柴胡中提取的主要活性成分，有糖皮質(zhì)激素(GC)樣甾環(huán)結(jié)構(gòu)，國內(nèi)外很多研究表明其具有抗炎

5、、免疫調(diào)節(jié)作用，因此觀察SSd對LN的療效和探索其作用機(jī)理，具有重要的臨床意義。 研究目的: 本實驗擬應(yīng)用從中藥柴胡中提取的活性成分SSd來治療NZBWF1小鼠，觀察動物尿排泄物、腎功能和血清皮質(zhì)酮、血循環(huán)中自身抗體、腎組織病理改變以及腎組織中細(xì)胞因子表達(dá)等變化，在取得預(yù)期療效的基礎(chǔ)上，深入探討SSd對LN治療的作用機(jī)制，為SSd治療LN提供實驗和理論依據(jù)。 材料和方法: 雌性NZBWF1小鼠，18周齡，

6、20只，隨機(jī)分為3組，Ⅰ組(SSd治療1組，n=8，每天腹腔注射(ip)SSd，劑量0.2mg/100g體重，濃度0.2mg/ml)，Ⅱ組(SSd治療2組，n=6，每天ip SSd，劑量0.4mg/100g體重，濃度0.4mg/ml)，Ⅲ組(空白對照組，n=6，每天ip無菌生理鹽水1ml/100g體重)，共6周，每兩周取各組小鼠隨機(jī)尿，于實驗第6周末處死3組全部小鼠，取血及腎組織標(biāo)本。用考馬斯亮藍(lán)法檢測小鼠尿蛋白，自動生化分析儀測定小鼠

7、血清肌酐(Cr)，酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定小鼠血清中抗ds-DNA抗體和皮質(zhì)酮水平，對腎組織進(jìn)行光鏡、電鏡和免疫熒光檢查以觀察腎組織學(xué)變化，并用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測細(xì)胞因子的變化，定期觀察小鼠的精神、活動、皮毛、體重等狀況。 結(jié)果: 與空白對照組相比，SSd治療組的尿蛋白含量，血清肌酐和抗ds—DNA抗體以及小鼠腎組織IL-6和IL-10 mRNA表達(dá)顯著降低，血清皮質(zhì)酮水平顯著升高，差

8、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；小鼠腎組織系膜增生、腎小球細(xì)胞增多，透明變性、腎小球硬化以及滲出得到改善，腎小管受損百分比降低，IgG、IgA以及IgM等形成的免疫復(fù)合物沉積減少，電鏡下沉積物減少，細(xì)胞增生減少，足突融合現(xiàn)象改善。小鼠體重有所增高。 結(jié)論: 1．SSd對NZBWF1小鼠LN有治療作用： (1)降低尿蛋白含量； (2)降低血清肌酐水平； (3)降低血清抗ds-DNA水平； (