薯蕷皂苷元抗腫瘤作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討薯蕷皂苷元（Diosgenin,Dio）體內(nèi)外抗腫瘤作用及其作用機(jī)制.方法：1.動物整體抑瘤實(shí)驗(yàn)方法.生命延長率實(shí)驗(yàn)方法：昆明小鼠腹腔接種HepA瘤細(xì)胞懸液.記錄動物存活的天數(shù)及生命延長率.昆明小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)方法：小鼠左腋部皮下分別接種S<,180>、HepA、U<,14>和EAC.灌胃或皮下注射給藥，每日1次，連續(xù)給藥10天.比較藥物的抑瘤作用.Wistar大鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)方法：大鼠左腋部皮下接種W<,256>瘤細(xì)胞混懸液.接瘤次

2、日開始灌胃給藥.連續(xù)給藥14天.比較各組間腫瘤重量的差異性.并計(jì)算出腫瘤抑制百分率.裸鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)方法：裸鼠左側(cè)腋部皮下植入1mm<'3>（重量約40mg）MGC-803瘤塊.灌胃給藥周期為6周.比較組間腫瘤重量差異.并求出腫瘤抑制百分率.2.細(xì)胞離體抑瘤實(shí)驗(yàn)方法.Dio對十種人體腫瘤細(xì)胞株生長抑制作用，采用MTT比色法;Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞DNA合成的影響，采用<'3>H-TdR摻入法;Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞分裂及集落

3、形成能力的影響，采用平板集落形成法.3.細(xì)胞周期分布及凋亡檢測方法.采用普通光鏡和透射電鏡技術(shù)，觀察Dio引起的MGC-803腫瘤細(xì)胞與凋亡相關(guān)的形態(tài)學(xué)改變;采用流式細(xì)胞術(shù)，觀察Dio對MGC-803和A375-S<,2>腫瘤細(xì)胞增殖周期和凋亡的影響;采用瓊脂糖凝膠電泳方法，觀察Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞基因組DNA片斷降解、斷裂的影響;分別用Annexin V-FITC和APO-BRDU Kit細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，通過流式細(xì)胞儀觀

4、察Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡的影響;采用酶聯(lián)免疫法觀察Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞Caspase-3活力的影響;以及Caspase-3抑制.4.基因表達(dá)檢測方法.將與細(xì)胞周期、細(xì)胞激素、細(xì)胞能量代謝、受體、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄因子和管家基因等相關(guān)的4000條cDNA制成基因芯片，觀察Dio對MGC-803腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)的影響.Dio不論是在動物整體還是細(xì)胞離體，均具有明顯的抗腫瘤作用.其抗腫瘤作用機(jī)制，與其增強(qiáng)腫瘤細(xì)