100例原發(fā)性胃腸道間質(zhì)瘤的病理觀察及Gleevec靶向治療后耐藥機(jī)制的探討.pdf

1、目的：研究6例Gleevec靶向治療耐藥GIST的臨床病理、蛋白表達(dá)、超微結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)特征，與100例原發(fā)性GIST對(duì)照，找尋GIST耐藥的發(fā)生機(jī)制。 方法：采用免疫組化、電鏡和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及基因測(cè)序的方法，檢測(cè)100例原發(fā)性GIST和6例Gleevec靶向治療耐藥GIST蛋白(CD117、CD34、nestin、α-SMA、desmin和 S-100)表達(dá)、超微結(jié)構(gòu)和基因突變(c-kit基因和PDGFRa基因)情

2、況。6例耐藥患者在Gleevec治療前后共行20次手術(shù)治療的標(biāo)本均進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、免疫組化和基因突變篩查。其中Gleevec治療前11次，Gleevec治療15天后1次，Geevec耐藥后共8次(其中2位患者發(fā)生2次耐藥)。采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析原發(fā)性GIST中免疫組化的表達(dá)、基因突變與臨床病理，生物學(xué)行為的關(guān)系。比較原發(fā)性GIST與耐藥GIST在免疫組化、超微結(jié)構(gòu)和基因突變方式上的改變。 結(jié)果： 1、免疫組化檢測(cè)顯示

3、：100例原發(fā)性GIST中CD117、CD34和nestin的陽(yáng)性率分別為97.0％、78.0％和94.0％，多為彌漫強(qiáng)陽(yáng)性，均定位于細(xì)胞漿。α-SMA和S-100的陽(yáng)性率較低，分別為26.0％和24.0％，多為局灶陽(yáng)性。desmin僅2例局灶陽(yáng)性。6例耐藥患者原發(fā)腫瘤組織彌漫強(qiáng)表達(dá)CD117，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移后CD117表達(dá)有所下降，首次耐藥后CD117重新彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)至第二次耐藥后表達(dá)再次下降。6例原發(fā)腫瘤組織中CD117的表達(dá)均位于細(xì)

4、胞漿，耐藥后5例出現(xiàn)核旁點(diǎn)狀陽(yáng)性的表達(dá)現(xiàn)象。 2、超微結(jié)構(gòu)顯示：15例原發(fā)性GIST瘤細(xì)胞含豐富的線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和中間絲較多見，質(zhì)膜處偶爾分布一些微飲泡、密斑樣結(jié)構(gòu)和不連續(xù)基板，部分病例可見多量細(xì)長(zhǎng)指狀突起，未見明顯的平滑肌和神經(jīng)分化特征。。而耐藥GIST 細(xì)胞器更豐富，膜性結(jié)構(gòu)易見，細(xì)胞核形態(tài)怪異。 3、基因突變檢測(cè)顯示：100例原發(fā)性GIST的基因突變主要發(fā)生在c-kit基因的11外顯子(75.5％)

5、，主要集中在550～576位點(diǎn)，以缺失和點(diǎn)突變?yōu)橹饕绞?，偶可見重?fù)和插入。9外顯子突變率為(5.1％)，突變方式恒定，為ins AY502503；沒有檢測(cè)到13、17外顯子的突變。PDGFRα基因18外顯子突變率為(3.1％)，未檢測(cè)到PDGFRα基因12外顯子突變。耐藥GIST在原突變的基礎(chǔ)上，均發(fā)生了二次突變，突變位置為c-kit基因17外顯子(83.3％，5/6)和13外顯子(16.7％，1/6)。 結(jié)論： GIST主要