重組B群腦膜炎球菌fHBP融合蛋白的表達和免疫原性研究.pdf

1、A、C、Y、W135腦膜炎球菌多糖疫苗的使用有效的預防了細菌性腦膜炎的發(fā)生[1]。但由于B群腦膜炎奈瑟氏菌(Nesseria Meningitis Group B,MenB)莢膜多糖結構因與人體正在發(fā)育的神經組織及少數成熟組織中的神經細胞黏附分子同源,而不能激發(fā)有效的保護性免疫[2]。目前國內外有關MenB疫苗的研究主要集中于外膜蛋白上,其中位于MenB外膜上的與致病性密切相關的H因子結合蛋白(Factor H-binding Prot

2、ein,fHBP),由于其具有較高的保守性成為了最有希望的MenB候選疫苗抗原之一。在補體級聯反應中,H因子是補體替代途徑的關鍵調節(jié)子,它在因子I介導的Cab裂解為滅活片段iC3b過程中發(fā)揮輔助因子作用,也能促進替代途徑C3轉化酶C3bBb的衰變。fHBP和H因子的結合可下調替代途徑,從而有利于B群腦膜炎奈瑟菌在機體內的存活。根據fHBP氨基酸的差異,可以將MenB分為V1、V2、V3三個fHBP變異型,變異型內氨基酸序列高度保守而變異

3、型間差異較大,針對fHBP的抗體在變異型內具有保護作用[3、4]。分析fHBP氨基酸序列發(fā)現,fHBP包含有三個結構域ABC,A結構域在三個變型中是一致的,所有V1都表達的一個抗原表位位于B結構域,而V2或V3的抗原表位位于C結構域的174—216位氨基酸[5、6],V2與V3174—216位氨基酸序列僅有個別氨基酸差異[7]。因此,由V1變異型的全長fHBP和V2變異型C結構域174—216位氨基酸抗原表位組成的融合蛋白理論上有可能能

4、誘發(fā)機體產生針對所有MenB的保護性抗體。
　　 本實驗采用PCR構建了編碼B群腦膜炎球菌fHBP蛋白V1變異型全長序列和V2變異型C結構域具有免疫效應抗原表位融合蛋白的基因片段,將此基因片段克隆入pET30a(+)載體后,轉化E.coli BL21感受態(tài)細胞,IPTG誘導表達,表達產物經SDS-PAGE及Western blot鑒定分析,經層析純化,獲得的蛋白純度達到90％以上。融合蛋白免疫小鼠后,分別測定血清中fHBP特異抗