重組EPO-Fc融合蛋白對(duì)恒河猴的長(zhǎng)期毒性和免疫原性研究.pdf

1、目的：重組人EPO-Fc是從衍生的CHO培養(yǎng)液中提取，由人EPO、肽接頭和人：IgG Fc段重組形成的融合蛋白，屬于新一代的EPO產(chǎn)品的生物技術(shù)藥物。目前其毒性反應(yīng)和免疫原性尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以恒河猴為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停^察EPO-Fc對(duì)其主要器官和系統(tǒng)的毒性反應(yīng)，確定其毒性作用的靶器官和損害的可逆性；并通過(guò)檢測(cè)用藥期間和恢復(fù)期血清中抗．EPO-Fc的結(jié)合抗體和中和抗體，判斷該產(chǎn)品免疫原性的強(qiáng)弱，為確定中和抗體對(duì)臨床療效的潛在影響提供科學(xué)依據(jù)。

2、 方法：恒河猴長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)分為EPO-Fc高、中、低三個(gè)劑量組(80、25、8μg·kg<'-1>)和一個(gè)PBS溶劑對(duì)照組，每組6只，雌雄各半。皮下注射給予受試品，每周一次，連續(xù)24周。末次給藥后24小時(shí)內(nèi)處死三分之二的動(dòng)物進(jìn)行病理解剖和組織學(xué)檢查，剩余動(dòng)物停藥后繼續(xù)觀察8周后處理同上。試驗(yàn)期間的觀察體征和檢測(cè)指標(biāo)包括：一般生理情況觀察、血液學(xué)、血生化、血電解質(zhì)、血流變、心電圖、糞尿、眼底檢查、骨髓檢查，病理組織學(xué)、補(bǔ)體、免疫復(fù)

3、合物、免疫球蛋白、血清結(jié)合抗體(ELISA橋法)等各項(xiàng)檢測(cè)，分別于給藥期及恢復(fù)期的不同時(shí)點(diǎn)進(jìn)行。 結(jié)果：動(dòng)物按中、高劑量給予受試物后，均能引起紅細(xì)胞(RBC)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RET)的明顯上升，并引起相應(yīng)的紅細(xì)胞壓積(HCT)和血紅蛋白(HGB)明顯上升，以及血流變指標(biāo)的改變，表現(xiàn)為高劑量組全血粘度值和全血高切、低切指數(shù)的升高；高、中、低三個(gè)劑量組的血沉降低。這些改變與EPO-Fc的藥理學(xué)作用有關(guān)。血凝檢查發(fā)現(xiàn)中、高劑量組凝血

4、酶原時(shí)間(PT)和活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)延長(zhǎng)；給藥第2周起，低劑量組有1只動(dòng)物抗體檢測(cè)陽(yáng)性。第5周，低、高劑量各有2只動(dòng)物呈抗體陽(yáng)性，至給藥第18周，低、中、高劑量組動(dòng)物抗體陽(yáng)性率分別為100％、83％、100％。恢復(fù)期，抗體滴度逐漸降低。給藥組動(dòng)物CD3、CD8、CD20等免疫相關(guān)因子以及補(bǔ)體、免疫復(fù)合物和IgG、IgM均未見(jiàn)異常。動(dòng)物的一般生理狀況、癥狀體征、行為活動(dòng)、血液生化、電解質(zhì)，糞尿指標(biāo)、心電圖、骨髓及眼底檢查均未見(jiàn)