外用中藥與組織工程技術相結合修復皮膚缺損的實驗研究.pdf

1、該研究目的:1.建立和完善皮膚細胞分離和純化技術.2.將中西醫(yī)結合治療感染性開放骨折的特色中藥應用于組織工程皮膚的構建;制備高效免疫活性的皮膚細胞誘導物,使自體皮膚細胞在體外大量擴增;構建載藥皮膚工程支架,通過體外觀察,為制備新型的具有良好組織相容性、生物安全性、抗感染性、便于使用和貯存的組織工程皮膚提供實驗依據.方法:1.取同窩兔4cm<'2>梭形全層皮膚,0.38％中性蛋白酶(Dispase Ⅱ)/0.053％胰蛋白酶(Trypsi

2、n)-0.04％EDTA二步分離法獲取單個表皮細胞(Keratinocyte,KC)、成纖維細胞(Fibroblast,FB);對分離培養(yǎng)KC進行角蛋白19、β<,1>整合素免疫組化染色鑒定.2.提取制備生肌液;對組方及單味藥的離子濃度、有機物含量、微量元素含量進行分析;將其作為種子細胞刺激因素,分別用體外培養(yǎng)的KC、FB用MTT方法進行應用濃度篩選.3.考察明膠-殼聚糖復合材料的體內降解過程;構建細胞-載體支架復合物;分別用半定量觀察

3、、MTT定量方法、組織學觀察、掃描電鏡觀察方法考察載體支架與細胞的生物相容性及載藥后對細胞增殖的影響.4.應用所構建的細胞-載藥支架復合物修復家兔皮膚缺損;進行大體及組織學觀察,考察修復效果.結論:1.采用DispaseⅡ/Trypsin-EDTA二步法可獲得具有強大的潛在增殖能力、高純度的KC.2.生肌液不但是一種具有高效免疫活性的皮膚細胞誘導物,而且對細胞的增殖作用具有一定量效和時效關系,復方藥中各種組分相互協(xié)同、拮抗、調節(jié)而形成一

4、個相對穩(wěn)定的促增殖環(huán)境.3.載有生肌液的明膠-殼聚糖基質材料除具有一定三維結構,使細胞能夠在其表面和孔隙中生長,符合組織工程對于細胞支架材料的要求外,且有效促進KC和FB的增殖功能并能夠有效抑制炎性反應.4.將處于增殖最旺盛時期的種子細胞與含有誘導作用的藥物-載體支架復合貼附于創(chuàng)面,使種子細胞在最適環(huán)境中增殖、分化,能夠在最短的時間內有效擴展皮膚缺損處的覆蓋面積,盡量縮短創(chuàng)面愈合時間,新生的鱗狀上皮組織符合正常表皮的結構特征,從而達到快