落新婦苷對腸道CD103a+樹突狀細胞活性的調控及其機制.pdf

1、炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease，IBD）作為一類腸道慢性、非特異性、炎癥性疾病，主要包括潰瘍性結腸炎和克羅恩病。該疾病目前治療方法局限，有效率低且副作用多。腸道樹突狀細胞(dendritic cells，DC)主要包括CD103+CX3CR1-DC和CD103-CX3CR1+DC兩個亞群。落新婦苷(astilbin)是土茯苓的主要單體成分之一，課題組前期工作已經證明，落新婦苷可以抑制DSS腸炎小鼠的發(fā)病

2、，促進DSS誘導腸炎小鼠體內CD103a+DC頻率的上調，及誘導調節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Treg)產生。本研究擬進一步探討落新婦苷對腸道CD103+DC亞群細胞活性的影響及其分子機制。
　　目的：
　　觀察落新婦苷對DSS誘導腸炎小鼠脾臟及腸道CD103a+DC分布的影響，以及CD103a+DC經落新婦苷預處理后對Treg細胞誘生的影響，并初步探討落新婦苷調控CD103a+DC細胞活性的分子機制。

3、
　　方法：
　　首先采用DSS誘導腸炎小鼠，流式細胞術(FCM)檢測經落新婦苷處理前、后，腸炎小鼠脾臟、腸道CD103a+DC及Treg細胞的頻率，分析二者的相關性。檢測DSS-腸炎小鼠CD103a+DC表面B7H1、CD86、IL-15Rα的表達及IL-10、TGF-β、IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌。并利用不同濃度落新婦苷體外直接刺激脾臟單細胞懸液，分析CD103a+DC表面分子的表達及相關細胞因子

4、的分泌。在此基礎上，流式細胞術分選CD103a+DC、CD103a-DC，分別用落新婦苷處理后，檢測CD103a+DC、CD103a-DC表面CD86、B7H1的表達，酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測細胞培養(yǎng)上清IL-10、TGF-β的含量。另外，將不同濃度落新婦苷刺激后的CD103a+ DC、CD103a-DC與CD4+T細胞共孵育，檢測Treg細胞的頻率。流式細胞術和Western Blot方法分別檢測，經落新婦苷刺激的SGC-7901細胞和C

5、D103a+DC，胞內STAT3分子磷酸化位點（pY705及pS727）的表達。最后分析STAT3信號被特異性抑制后，CD103a+DC細胞表面CD86、B7H1表達及IL-10、IL-1β分泌的變化。
　　結果：
　　DSS-腸炎小鼠脾臟、腸道CD103a+DC的表達均高于對照組;落新婦苷可以增加DSS-腸炎小鼠腸道CD103a+DC及Treg細胞(CD4+CD25+CD127-)的頻率。落新婦苷腹腔注射的DSS-腸炎小鼠

6、CD103a+DC的B7H1、IL-10、TGF-β表達上調，IL-12、IL-6、IL-1β分泌減少，CD86、IL-15Rα、TNF-α表達無明顯變化。落新婦苷體外刺激脾臟單細胞懸液，CD103a+DC的B7H1、IL-10、TGF-β表達上調，IL-12、IL-6、IL-1β分泌減少，CD86、IL-15Rα、TNF-α表達無明顯變化。落新婦苷體外刺激， CD103a+DC表面CD86的表達無明顯變化，而B7H1、IL-10、TG

7、F-β表達上調，而CD103a-DC的CD86、B7H1、IL-10、TGF-β表達無明顯變化。經落新婦苷預處理的小鼠CD103a+ DC可誘導Treg(CD4+CD25+Foxp3+T)細胞的生成，而CD103a-DC共孵育的Treg頻率無明顯變化。落新婦苷刺激SGC-7901及CD103a+DC細胞內STAT3分子(pY705及pS727)的表達明顯上調，而CD103a-DC pY705及pS727表達無明顯變化。加入STAT3抑制