落新婦苷對(duì)腸道CD103a+樹突狀細(xì)胞活性的調(diào)控及其機(jī)制.pdf

1、炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease，IBD）作為一類腸道慢性、非特異性、炎癥性疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。該疾病目前治療方法局限，有效率低且副作用多。腸道樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)主要包括CD103+CX3CR1-DC和CD103-CX3CR1+DC兩個(gè)亞群。落新婦苷(astilbin)是土茯苓的主要單體成分之一，課題組前期工作已經(jīng)證明，落新婦苷可以抑制DSS腸炎小鼠的發(fā)病

2、，促進(jìn)DSS誘導(dǎo)腸炎小鼠體內(nèi)CD103a+DC頻率的上調(diào)，及誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)產(chǎn)生。本研究擬進(jìn)一步探討落新婦苷對(duì)腸道CD103+DC亞群細(xì)胞活性的影響及其分子機(jī)制。
　　目的：
　　觀察落新婦苷對(duì)DSS誘導(dǎo)腸炎小鼠脾臟及腸道CD103a+DC分布的影響，以及CD103a+DC經(jīng)落新婦苷預(yù)處理后對(duì)Treg細(xì)胞誘生的影響，并初步探討落新婦苷調(diào)控CD103a+DC細(xì)胞活性的分子機(jī)制。

3、
　　方法：
　　首先采用DSS誘導(dǎo)腸炎小鼠，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)經(jīng)落新婦苷處理前、后，腸炎小鼠脾臟、腸道CD103a+DC及Treg細(xì)胞的頻率，分析二者的相關(guān)性。檢測(cè)DSS-腸炎小鼠CD103a+DC表面B7H1、CD86、IL-15Rα的表達(dá)及IL-10、TGF-β、IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌。并利用不同濃度落新婦苷體外直接刺激脾臟單細(xì)胞懸液，分析CD103a+DC表面分子的表達(dá)及相關(guān)細(xì)胞因子

4、的分泌。在此基礎(chǔ)上，流式細(xì)胞術(shù)分選CD103a+DC、CD103a-DC，分別用落新婦苷處理后，檢測(cè)CD103a+DC、CD103a-DC表面CD86、B7H1的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-10、TGF-β的含量。另外，將不同濃度落新婦苷刺激后的CD103a+ DC、CD103a-DC與CD4+T細(xì)胞共孵育，檢測(cè)Treg細(xì)胞的頻率。流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot方法分別檢測(cè)，經(jīng)落新婦苷刺激的SGC-7901細(xì)胞和C

5、D103a+DC，胞內(nèi)STAT3分子磷酸化位點(diǎn)（pY705及pS727）的表達(dá)。最后分析STAT3信號(hào)被特異性抑制后，CD103a+DC細(xì)胞表面CD86、B7H1表達(dá)及IL-10、IL-1β分泌的變化。
　　結(jié)果：
　　DSS-腸炎小鼠脾臟、腸道CD103a+DC的表達(dá)均高于對(duì)照組;落新婦苷可以增加DSS-腸炎小鼠腸道CD103a+DC及Treg細(xì)胞(CD4+CD25+CD127-)的頻率。落新婦苷腹腔注射的DSS-腸炎小鼠

6、CD103a+DC的B7H1、IL-10、TGF-β表達(dá)上調(diào)，IL-12、IL-6、IL-1β分泌減少，CD86、IL-15Rα、TNF-α表達(dá)無明顯變化。落新婦苷體外刺激脾臟單細(xì)胞懸液，CD103a+DC的B7H1、IL-10、TGF-β表達(dá)上調(diào)，IL-12、IL-6、IL-1β分泌減少，CD86、IL-15Rα、TNF-α表達(dá)無明顯變化。落新婦苷體外刺激， CD103a+DC表面CD86的表達(dá)無明顯變化，而B7H1、IL-10、TG

7、F-β表達(dá)上調(diào)，而CD103a-DC的CD86、B7H1、IL-10、TGF-β表達(dá)無明顯變化。經(jīng)落新婦苷預(yù)處理的小鼠CD103a+ DC可誘導(dǎo)Treg(CD4+CD25+Foxp3+T)細(xì)胞的生成，而CD103a-DC共孵育的Treg頻率無明顯變化。落新婦苷刺激SGC-7901及CD103a+DC細(xì)胞內(nèi)STAT3分子(pY705及pS727)的表達(dá)明顯上調(diào)，而CD103a-DC pY705及pS727表達(dá)無明顯變化。加入STAT3抑制