端粒DNA二級結(jié)構(gòu)變化對舌鱗癌細(xì)胞端粒功能影響的研究.pdf

1、目的:G4是端粒末端形成的特殊結(jié)構(gòu),對維持端粒正常功能及正常細(xì)胞基本生命活動有重要影響作用.本研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)間接證明G4可能是細(xì)胞染色體端粒末端的正常結(jié)構(gòu);另外,從目前研究的系列G4配體中,選擇蒽醌類衍生物—阿霉素作為研究對象,觀察其對G4結(jié)構(gòu)和舌鱗癌Tca8113細(xì)胞端粒酶活性的影響,證明阿霉素具有G4配體功能并可通過穩(wěn)定G4抑制舌鱗癌細(xì)胞端粒酶活性,以進(jìn)一步探討蒽醌類抗腫瘤藥物發(fā)揮藥理作用的機(jī)制及能否成為研制新型端粒酶抑制劑的最

2、好備選者;其次,觀察穩(wěn)定G4結(jié)構(gòu)對舌鱗癌端粒酶活性產(chǎn)生影響的同時(shí),研究其對舌鱗癌細(xì)胞增殖生長及衰老凋亡會產(chǎn)生怎樣的影響,以探討G4成為新的抗腫瘤治療靶點(diǎn)的可能性;最后,通過觀察端粒結(jié)合蛋白在舌鱗癌細(xì)胞中表達(dá)的特點(diǎn),探討端粒結(jié)合蛋白和G4在端粒維持機(jī)制中的作用.方法:首先,在體外生理濃度鉀離子、鈉離子存在下,利用NMR光譜儀觀察含端粒重復(fù)序列的核苷酸在特定區(qū)域內(nèi)NMR光譜的變化;再通過NMR連續(xù)變溫實(shí)驗(yàn),觀察鉀離子、鈉離子及阿霉素對含端粒

3、重復(fù)序列核苷酸形成的G4結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響.另外,利用非變性PAGE技術(shù)觀察鉀離子、鈉離子和阿霉素對含不同長度端粒序列的核苷酸在電泳中遷移速度的影響.隨后,采用MTT法檢測阿霉素對舌鱗癌Tca8113細(xì)胞生長的影響,確定其50﹪生長抑制的阿霉素作用濃度,從中選擇亞細(xì)胞毒劑量范圍內(nèi)的阿霉素進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察在傳統(tǒng)TRAP法和改良TRAP-G4法中對舌鱗癌Tca8113細(xì)胞端粒酶活性影響的變化特點(diǎn).在改良TRAP-G4法中,用含四個(gè)GGG串聯(lián)排列