端粒DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)變化對(duì)舌鱗癌細(xì)胞端粒功能影響的研究.pdf

1、目的:G4是端粒末端形成的特殊結(jié)構(gòu),對(duì)維持端粒正常功能及正常細(xì)胞基本生命活動(dòng)有重要影響作用.本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)間接證明G4可能是細(xì)胞染色體端粒末端的正常結(jié)構(gòu);另外,從目前研究的系列G4配體中,選擇蒽醌類(lèi)衍生物—阿霉素作為研究對(duì)象,觀察其對(duì)G4結(jié)構(gòu)和舌鱗癌Tca8113細(xì)胞端粒酶活性的影響,證明阿霉素具有G4配體功能并可通過(guò)穩(wěn)定G4抑制舌鱗癌細(xì)胞端粒酶活性,以進(jìn)一步探討蒽醌類(lèi)抗腫瘤藥物發(fā)揮藥理作用的機(jī)制及能否成為研制新型端粒酶抑制劑的最

2、好備選者;其次,觀察穩(wěn)定G4結(jié)構(gòu)對(duì)舌鱗癌端粒酶活性產(chǎn)生影響的同時(shí),研究其對(duì)舌鱗癌細(xì)胞增殖生長(zhǎng)及衰老凋亡會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響,以探討G4成為新的抗腫瘤治療靶點(diǎn)的可能性;最后,通過(guò)觀察端粒結(jié)合蛋白在舌鱗癌細(xì)胞中表達(dá)的特點(diǎn),探討端粒結(jié)合蛋白和G4在端粒維持機(jī)制中的作用.方法:首先,在體外生理濃度鉀離子、鈉離子存在下,利用NMR光譜儀觀察含端粒重復(fù)序列的核苷酸在特定區(qū)域內(nèi)NMR光譜的變化;再通過(guò)NMR連續(xù)變溫實(shí)驗(yàn),觀察鉀離子、鈉離子及阿霉素對(duì)含端粒

3、重復(fù)序列核苷酸形成的G4結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響.另外,利用非變性PAGE技術(shù)觀察鉀離子、鈉離子和阿霉素對(duì)含不同長(zhǎng)度端粒序列的核苷酸在電泳中遷移速度的影響.隨后,采用MTT法檢測(cè)阿霉素對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,確定其50﹪生長(zhǎng)抑制的阿霉素作用濃度,從中選擇亞細(xì)胞毒劑量范圍內(nèi)的阿霉素進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察在傳統(tǒng)TRAP法和改良TRAP-G4法中對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞端粒酶活性影響的變化特點(diǎn).在改良TRAP-G4法中,用含四個(gè)GGG串聯(lián)排列