靶向hTERT反義寡核苷酸對人舌鱗癌細胞增殖和端粒酶的抑制作用.pdf

1、浙江大學博士學位論文靶向hTERT反義寡核苷酸對人舌鱗癌細胞增殖和端粒酶的抑制作用姓名：姚華申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：吳求亮王慧明20050501浙江大學博士學位論文近年來大量研究發(fā)現(xiàn)端粒酶是人體內最具腫瘤特異性和高表達的生物學標志，85％以上的惡性腫瘤有端粒酶活性而正常體細胞幾乎未見其表達。它是由端粒酶RNA、端粒酶逆轉錄酶(humantelomeraseFeve[setranscriptase，hTERT)基因和

2、端粒酶相關蛋白構成的復合體，以自身RNA為模板逆轉錄合成端粒重復序列(TTAGGG)n，維持端粒長度。深入研究發(fā)現(xiàn)，hTERT與端粒酶活性平行，并決定端粒酶活性，是端粒酶激活的限速步驟。90％以上惡性腫瘤有hTERT轉錄，hTERT比端粒酶RNA與惡性腫瘤更具相關性。用反義hl’ERT導入肝癌細胞。白血病細胞等癌細胞后具有明顯抑制生長及誘導凋亡作用；將高表達hTERT癌細胞敲除hTERTmRNA后，細胞惡性表型出現(xiàn)逆轉；正常細胞導入hT

3、ERT后，細胞永生化，經分裂數(shù)代后出現(xiàn)惡性生物學行為。這些證據表明，hTERT與癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，hTERT已成為抗癌治療的靶點。而國內外文獻，尚未見有以hTERT為靶點抑制舌鱗癌的系統(tǒng)報道。本研究通過實時熒光定量法檢測口腔鱗癌組織中hTERTmRNA的表達情況，探討hTERT在口腔中表達的意義。以端粒酶逆轉錄酶基因作為分子靶點，設計一段與之互補的反義寡核苷酸序列，采用具有轉染率高、毒性低的陽離子脂質體作介導，將hTERT反義寡核苷

4、酸導入口腔鱗癌Tca8113細胞，探討其對細胞增殖、凋亡、細胞周期和端粒酶活性的影響及機理。將經過hTERT反義寡核苷酸預處理的Tca8113細胞接種于裸鼠，觀察lca8I】3細胞裸鼠移植瘤成瘤時間、瘤重和端粒酶變化，了解hTERT反義寡核苷酸在體內環(huán)境下對Tca8Il3細胞生物學行為的影響。通過上述系統(tǒng)研究，探討以hTERT為靶點開展抗舌癌研究的可行性，為深入研究提供實驗依據。材料與方法1研究對象；新鮮口腔鱗癌及其手術切緣組織、正常口