FILIP1L重組蛋白及抗體研制.pdf

1、河南大學碩士學位論文FILIP1L重組蛋白及抗體研制姓名：馬華娟申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：盧鋒李淑蓮20100501FILIPlLt組蛋白及抗體研制從食管上皮鱗癌細胞EC9706中提取mRNA并反轉錄成cDNA，利用RTPCR技術擴增含有全長FILIPlL基因(963bp左右)的cDNA，將其定向插入原核表達載體pET22b，經測序確定載體構建成功后，誘導重組質粒蛋白表達；Westernbloming檢測表達蛋白成功，并利

2、用親和層析技術純化得到誘導蛋白；用誘導蛋白免疫動物制備多克隆抗體，進一步運用免疫共沉淀技術檢測FILIPlL的相互作用蛋白表達差異。結果1從食管上皮鱗癌細胞EC9706中得到了FILIPlL胞外段基因，驗證序列準確無誤；2構建了FILIPlL原核表達載體并誘導誘導蛋白表達，純化得到高純度蛋白。3運用純化得到的蛋白制備得到效價為1：1106的高效價多克隆抗體。4利用免疫共沉淀技術篩選正常食管上皮細胞NEC與食管上皮鱗癌細胞EC9706中的

3、與FILIPlL相關蛋白的表達差異情況。結論本研究從食管上皮鱗癌細胞9706中得到了FILIPlL胞外段基因，構建了FILIPlL原核表達載體，利用FILIPlL重組質粒表達融合蛋白，并制備多克隆抗體，檢測正常組織與腫瘤組織中相互作用蛋白的差異表達，發(fā)現(xiàn)6個與FILIPlL相關的蛋白條帶在食管癌細胞與正常食管上皮細胞中的表達有差異，對這些蛋白條帶的進一步鑒定，將為今后進一步闡明FILIPlL蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中抑制腫瘤血管生成作用的