hTFPI重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化.pdf

1、在多種疾病進(jìn)程中，包括癌癥、心腦血管疾病和炎癥等，由組織因子(tissUe factor，TF)引發(fā)的外源性凝血系統(tǒng)的激活扮演重要角色，一些患者因此致死。組織因子途徑抑制因子(tissue factorpathwav inhibitor，TFPI)是抑制外源凝血的一種重要蛋白因子。大量臨床實驗和動物實驗證明，重組人組織因子途徑抑制因子(humanrecombinant tissue factor pathway inhibitor，rh

2、TFPI)對血栓形成、感染性休克、血管再狹窄、內(nèi)毒素血癥和DIC等具有明顯防治作用，在臨床上有廣泛的應(yīng)用前景。 目前，用多種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)rhTFPI的效果很不理想，存在的主要問題是表達(dá)量較低，以哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量最高(約2-5mg/L)，但成本也最高。我們應(yīng)用巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行了rhTFPI的表達(dá)。通過優(yōu)化表達(dá)條件，使搖瓶培養(yǎng)下的rhTFPI的表達(dá)量達(dá)到了1.6mg/L；應(yīng)用發(fā)酵罐進(jìn)行高密度培養(yǎng)后，表達(dá)量比搖瓶

3、培養(yǎng)方式提高了近2倍，達(dá)到了4.6mg/L。隨后，我們建立了相應(yīng)的純化方法，應(yīng)用了硫酸銨分級沉淀，陰離子交換層析和凝膠過濾層析，純化收率為43.1±O.38％，蛋白純度大于95％。實驗結(jié)果顯示，利用巴斯德畢赤酵母表達(dá)rhTFPI與其他表達(dá)系統(tǒng)相比具有以下優(yōu)勢：與哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)相比具有成本優(yōu)勢，無論是細(xì)胞培養(yǎng)成本和還是蛋白純化成本，前者都比后者明顯低廉；與大腸桿菌表達(dá)體系相比，具有表達(dá)量高，純化簡單，且重組蛋白翻譯后修飾更接近于天然