

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景:
肝纖維化是由多種病因所引起的慢性肝臟疾病的共同病理過程,其主要特征為細胞外基質(extracellular matrix,ECM)增生與降解失衡,導致肝臟內ECM過度沉積?;罨母涡菭罴毎╤epatic stellate cells,HSCs)是ECM產(chǎn)生的主要細胞來源,因此,原代肝星狀細胞(Quiescent hepatic stellate cells,Q-HSCs)的激活、增殖并轉化為成纖維細胞樣肝星狀細胞(m
2、yofibroblastic hepatic stellate cells,MF-HSCs)在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中起著關鍵性作用。Hedgehog(Hh)信號通路在肝臟胚胎發(fā)育以及成熟肝臟的損傷修復過程發(fā)揮著重要的作用。越來越多研究表明,Hh信號通路的持續(xù)激活促進Q-HSC轉化為MF-HSC,進而促進肝纖維化發(fā)展。NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)參與介導一系列促纖維化信號通路,有學者研究發(fā)現(xiàn),NOX亞基Rac1參
3、與了對Hh信號通路的調控,它能激活Hh通路,進而促使Q-HSC激活轉化為MF-HSC。我們前期研究發(fā)現(xiàn)熊果酸能顯著抑制瘦素誘導的HSC-T6中NOX亞基Rac1蛋白表達,進而抑制Hh信號通路活性?;谝陨涎芯考扒捌谘芯砍晒?,本研究將進一步以原代HSC為研究對象,觀察Q-HSC轉化過程中NOX對Hh信號通路的調控作用及熊果酸對該信號網(wǎng)絡的的影響。
目的:
觀察Q-HSC活化轉化過程中NOX對Hh信號通路的調控作用,明確
4、熊果酸對NOX-Hh信號網(wǎng)絡的影響及機制。
方法:
取分離提取長至第5天的原代肝星狀細胞,隨機分成以下各組:正常對照組;熊果酸組(40μM);TGF-β組(5μg/L);熊果酸干預組(TGF-β+熊果酸);DPI干預組(TGF-β+DPI10μM)。干預組分別給予熊果酸和DPI(NOX特異性抑制劑)預處理半小時之后再加入TGF-β,各組經(jīng)相應藥物作用12h后,提取細胞總RNA,用qRT-PCR法檢測藥物處理后HSC對
5、I型膠原和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)mRNA表達以及Hh信號通路中Shh、Smo、Gli2和NOX亞基Rac1的mRNA表達;藥物作用24小時后,提取每組HSC總蛋白,采用Western blotting分別檢測Rac1、Shh、Smo、Gli2及α-SMA蛋白表達。
結果:
1.熊果酸對Q-HSC活化過程中I型膠原mRNA、α-SMA mRNA表達的影響
TGF-β刺激原代HSC12h后,I型膠原和
6、α-SMA mRNA的表達比空白對照組明顯增加(P<0.01);熊果酸自身對照組I型膠原和α-SMA mRNA表達明顯低于空白對照組(P<0.05;P<0.01);在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸進行干預后其I型膠原和α-SMA mRNA水平較TGF-β刺激組顯著降低(P<0.01),并且與NOX的抑制劑DPI相比I型膠原和α-SMA mRNA的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果說明,原代HSC在活化過程中I型膠原和α-
7、SMA mRNA表達明顯升高,而熊果酸干預能抑制原代HSC活化過程中I型膠原和α-SMA mRNA表達。
2.熊果酸對Q-HSC活化過程中Rac1 mRNA表達的影響
TGF-β刺激原代HSC12h后,Rac1 mRNA的表達比空白對照組明顯增加(P<0.01);熊果酸自身對照組Rac1 mRNA表達明顯低于空白對照組(P<0.05);在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸進行干預后其Rac1 mRNA水平較TGF
8、-β刺激組顯著降低(P<0.05),并且與NOX的抑制劑DPI相比Rac1 mRNA的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果說明,原代HSC在活化過程中NOX亞基Rac1表達上調,熊果酸可抑制原代HSC活化過程中NOX亞基Rac1 mRNA的表達。
3.熊果酸對Q-HSC活化過程中Shh、Smo、Gli2 mRNA表達的影響
TGF-β刺激原代HSC12h后,Shh、Smo、Gli2 mRNA的表達比空白對照組明
9、顯增加(P<0.01;P<0.01;P<0.05);熊果酸自身對照組Shh、Smo、Gli2 mRNA表達明顯低于空白對照組(P<0.01;P<0.01;P<0.05);在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸進行干預后其Shh、Smo、Gli2 mRNA水平較TGF-β刺激組顯著降低(P<0.01),并且與NOX的抑制劑DPI相比Shh、Smo、Gli2 mRNA的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果說明,原代HSC在活化過程中
10、Hh信號通路的Shh、Smo、Gli2基因表達上調,NOX參與了Shh、Smo、Gli2基因表達的調控,熊果酸可抑制原代HSC活化過程中Shh、Smo、Gli2 mRNA的表達。
4.熊果酸對Q-HSC活化過程中α-SMA蛋白表達的影響
TGF-β刺激原代HSC24h后,α-SMA蛋白表達比空白對照組明顯增加(P<0.01);熊果酸自身對照組α-SMA蛋白表達明顯低于空白對照組(P<0.05);在TGF-β刺激原代H
11、SC之前加入熊果酸進行干預后其α-SMA蛋白水平較TGF-β刺激組顯著降低(P<0.01),并且與NOX的抑制劑DPI相比α-SMA蛋白表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。由于α-SMA蛋白是HSC活化的標志,以上結果說明NOX介導了TGF-β誘導的原代HSC活化,熊果酸可抑制原代HSC活化。
5.熊果酸對Q-HSC活化過程中Rac1蛋白表達的影響
TGF-β刺激原代HSC24h后,Rac1蛋白表達比空白對照組明顯增加
12、(P<0.05);熊果酸自身對照組Rac1蛋白表達明顯低于空白對照組(P<0.01);在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸進行干預后其Rac1蛋白水平較TGF-β刺激組顯著降低(P<0.01),并且與NOX的抑制劑DPI相比Rac1蛋白的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果說明,原代HSC活化過程中NOX亞基Rac1表達上調,熊果酸可抑制原代HSC活化過程中NOX亞基Rac1蛋白的表達。
6.熊果酸對Q-HSC活化過
13、程中Shh、Smo、Gli2蛋白表達的影響
TGF-β刺激原代HSC24h后,Shh、Smo、Gli2蛋白的表達比空白對照組明顯增加(P<0.05;P<0.05;P<0.01);熊果酸自身對照組Shh、Smo、Gli2蛋白表達明顯低于空白對照組(P<0.01);在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸進行干預后其Shh、Smo、Gli2蛋白表達水平較TGF-β刺激組顯著降低(P<0.01),并且與NOX的抑制劑DPI相比Shh
14、、Smo、Gli2蛋白的表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果說明,原代HSC在活化過程中Hh信號通路的Shh、Smo、Gli2蛋白表達上調,NOX參與了Shh、Smo、Gli2蛋白表達的調控,熊果酸可抑制原代HSC活化過程中Shh、Smo、Gli2蛋白的表達。
結論:
1、TGF-β誘導Q-HSC激活轉化為MF-HSC過程中NOX參與調控Hh信號通路Shh、Smo、Gli2的基因和蛋白表達。
2、熊果
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 熊果酸對肝星狀細胞Hedgehog信號通路的影響.pdf
- 熊果酸對大鼠活化型肝星狀細胞的NOX及其調控的信號網(wǎng)絡的影響.pdf
- 熊果酸對PDGF誘導的活化型肝星狀細胞內NOX信號通路的影響.pdf
- 熊果酸對大鼠肝星狀細胞NOX亞基p47phox及其調控的下游信號通路的影響.pdf
- 熊果酸對肝星狀細胞增殖與凋亡的影響.pdf
- 熊果酸對NADPH氧化酶亞基在靜止型肝星狀細胞活化過程中表達及功能的影響.pdf
- 熊果酸對大鼠肝星狀細胞內活性氧的影響及誘導肝星狀細胞凋亡機制的研究.pdf
- 粉防己堿對肝星狀細胞活化信號分子的影響.pdf
- 內毒素對大鼠原代肝星狀細胞及肝纖維化過程中肝臟內ERK1-2信號通路的影響.pdf
- Locostatin對肝星狀細胞膠原代謝的影響.pdf
- LPS刺激Kupffer細胞對肝星狀細胞活化的影響.pdf
- 熊果酸對大鼠肝纖維化過程中肝細胞的保護作用及其可能機制.pdf
- ADMA對肝星狀細胞活化及信號通路的實驗研究.pdf
- 熊果酸對肝星狀細胞NADPH氧化酶的亞基基因表達及酶活性的影響.pdf
- Wnt信號通路在肝星狀細胞活化中的作用觀察.pdf
- Hedgehog信號通路在肝再生過程中的表達.pdf
- 脂多糖對活化的肝星狀細胞凋亡的影響.pdf
- 熊果酸對血管緊張素Ⅱ誘導肝星狀細胞NADPH氧化酶的活化及PI3K-Akt、P38MAPK信號通路的影響.pdf
- 自噬抑制劑氯喹對體外活化肝星狀細胞膠原代謝的影響.pdf
- 巨噬細胞接觸對肝星狀細胞活化的研究.pdf
評論
0/150
提交評論