2個(gè)新突變導(dǎo)致血友病B的發(fā)病機(jī)制和部分遺傳性凝血因子缺陷癥的基因診斷.pdf

1、本研究分為三部分：對(duì)7個(gè)HB家系的先證者進(jìn)行了相關(guān)基因缺陷的檢測，并對(duì)國際上新發(fā)現(xiàn)的2種FⅨ基因突變進(jìn)行了體外表達(dá)研究，以探討其分子發(fā)病機(jī)制；同時(shí)還對(duì)1個(gè)遺傳性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷癥家系和兩個(gè)特殊的血友病A家系分別進(jìn)行了基因診斷?！　∫弧?個(gè)新突變導(dǎo)致血友病B的發(fā)病機(jī)制研究　　本研究對(duì)7例HB家系的先證者進(jìn)行了基因診斷，并對(duì)兩個(gè)國際上首次報(bào)道的突變進(jìn)行了分子發(fā)病機(jī)制的研究。檢測凝血指標(biāo)以明確診斷；用DNA直接測序法對(duì)先證者FⅨ基因

2、的全部外顯子及其側(cè)翼序列以及5’和3’非翻譯區(qū)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)突變基因。對(duì)這兩種突變，通過克隆野生型FⅨcDNA和構(gòu)建突變體進(jìn)行了體外表達(dá)研究。脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染HEK293或CHO細(xì)胞，體外表達(dá)后采用ELISA、Western印跡、免疫熒光染色和細(xì)胞分泌蛋白活性測定等試驗(yàn)進(jìn)行檢測。　　二、遺傳性凝血因子Ⅻ缺陷癥的基因診斷　　本文對(duì)該家系成員FⅫ基因所有外顯子及其側(cè)翼序列以及啟動(dòng)子區(qū)的測序分析表明：先證者的1號(hào)外顯子部位存在46C/T