煦少火膠囊對(duì)家兔主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是目前嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的一個(gè)多因素疾病，是引起冠心病最常見(jiàn)的原因，病變表現(xiàn)為在動(dòng)脈內(nèi)壁形成富含脂質(zhì)膽固醇的粥樣斑塊。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究，人類(lèi)認(rèn)識(shí)到血脂增高和紊亂是大多數(shù)AS發(fā)生的前提和基礎(chǔ)，而血管內(nèi)皮功能障礙在其中起著關(guān)鍵性的作用。血管新生是AS重要的病理學(xué)特征，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)是目前發(fā)現(xiàn)的唯一特異性促進(jìn)血管

2、內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長(zhǎng)因子，AS時(shí)缺血、缺氧可引起局部VEGF表達(dá)增強(qiáng)。近些年來(lái)的研究表明中醫(yī)藥在抗AS方面，尤其在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞上取得了可喜的成果，已成為目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。煦少火膠囊(由附子、西洋參、石菖蒲、丹參、枳殼、桔梗、葛根等組成)具有溫腎健脾，豁痰開(kāi)竅，活血化瘀的作用，臨床試驗(yàn)證實(shí)可有效治療AS相關(guān)性疾病。本課題擬通過(guò)對(duì)AS模型家兔的實(shí)驗(yàn)研究，探討煦少火膠囊抗AS，保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用機(jī)理，以及為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、 方法：選擇健康新西蘭純種雄性大白兔40只，體重2.5±0.5kg，家兔顆粒飼料平衡喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)取6只作為正常對(duì)照組，用普通飼料喂養(yǎng)，其余34只為高脂造模組，給予高脂飼料喂養(yǎng)(含1％膽固醇、5％豬油、10％蛋黃粉、84％普通飼料)，每日清晨喂養(yǎng)，自由飲水。8周后高脂造模組取2只實(shí)驗(yàn)家兔處死，光鏡下觀(guān)察，家兔動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，伴有大量泡沫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞排列凌亂、不連續(xù)，大量平滑肌細(xì)胞遷移內(nèi)膜，視為造模成功。將成模的32只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)

4、分為高脂模型組、煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組，每組8只，除正常對(duì)照組(6只)仍喂養(yǎng)普通飼料外，其余各組喂養(yǎng)飼料分別為：高脂飼料、高脂飼料+煦少火膠囊1.0g/d/Kg、高脂飼料+通心絡(luò)膠囊1.0g/d/Kg、高脂飼料+辛伐他汀2.5mg/d/Kg，自由飲水，繼續(xù)喂養(yǎng)4周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。最后一次給藥后空腹(禁食12-14小時(shí))抽取家兔耳靜脈血5ml，混勻后注入塑料試管內(nèi)，4℃3500r/min離心15分鐘，吸取血清裝入普通試管-20℃密封保

5、存，供檢測(cè)各組家兔血清TC、TG、LDL、HDL、NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1a等指標(biāo)使用。無(wú)菌操作選取升主動(dòng)脈作為標(biāo)本，用于病理組織學(xué)觀(guān)察。 結(jié)果：①對(duì)家兔血脂的影響：高脂模型組家兔血清TC、TG、LDL(23.24±4.101.33±0.0628.86±3.20)明顯增高，HDL(0.42±0.07)明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.01);煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組家兔血清TC、TG、LDL水平均低于高脂模型

6、組，有顯著性差異(P＜0.01)；組間比較顯示，煦少火組血清TC、TG、LDL的變化與辛伐他汀組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，TG、LDL較通心絡(luò)組降低明顯(P＜0.05)；煦少火組和辛伐他汀組均有升高AS家兔血清HDL水平的作用，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，兩組間相比較差異亦具有顯著性意義(P＜0.05)，通心絡(luò)組HDL升高不顯著，與煦少火組相比較差異顯著(P＜0.01)。②對(duì)家兔一氧化氮(NO)、內(nèi)

7、皮素(ET)的影響：與正常對(duì)照組相比較，高脂模型組家兔NO含量(49.35±3.24)明顯降低(P＜0.01)，ET含量(120.36±6.38)明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)過(guò)4周治療后，三個(gè)治療組血清NO水平均較高脂模型組有明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)，而煦少火組升高更加明顯，與通心絡(luò)組、辛伐他汀組相比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);三組ET水平均有明顯下降，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01)，煦少

8、火組與通心絡(luò)組相比較雖無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但優(yōu)越于辛伐他汀組(P＜0.01)。③對(duì)家兔血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a)的影響：高脂模型組家兔血清TXB2含量(404.74±13.65)明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，血清6-Keto-PGF1a含量(204.32±12.94)明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)，三組家兔血清TXB2均明顯降低，與高脂模型組相比較有顯著性差

9、異(P＜0.01)，煦少火組下降明顯，與通心絡(luò)組、辛伐他汀組相比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；三組家兔血清6-Keto-PGF1a均明顯高于高脂模型組，差異具有顯著性意義(P＜0.01)，但三組之間相比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。④家兔主動(dòng)脈病理組織學(xué)光鏡觀(guān)察：正常對(duì)照組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，無(wú)脂質(zhì)斑塊形成，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無(wú)泡沫細(xì)胞沉積；高脂模型組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜粗糙不平，有多量粥樣硬化斑塊形成，輕者斑塊主要局

10、限于主動(dòng)脈弓及分叉處，重者整條主動(dòng)脈內(nèi)膜可見(jiàn)彌漫分布的粥樣硬化斑塊形成，斑塊面積占整條主動(dòng)脈內(nèi)膜面積的比高達(dá)3.13±0.84，組織學(xué)切片見(jiàn)內(nèi)皮下大量泡沫細(xì)胞沉積；煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜雖可見(jiàn)粥樣硬化斑塊形成，但主要限于弓段和分叉處，斑塊面積占整條主動(dòng)脈內(nèi)膜面積的比(0.75±0.890.63±0.740.88±0.83)，程度輕于高脂模型組(P＜0.01)，三個(gè)組之間相比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，組織學(xué)切片

11、見(jiàn)內(nèi)皮下泡沫細(xì)胞沉積，但程度明顯輕于高脂模型組。⑤免疫組織化學(xué)染色：VEGF在正常對(duì)照組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜基本無(wú)表達(dá)，高脂模型組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜層染色呈棕黃色，VEGF強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，與正常對(duì)照組相比較差異有顯著性(P＜0.01)，煦少火組、通心絡(luò)組及辛伐他汀組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜層染色呈淺黃色，VEGF弱陽(yáng)性表達(dá)，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01)，三個(gè)組之間相比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：“陽(yáng)微陰弦”是胸痹的基本病因

12、病機(jī),上焦陽(yáng)虛，陰邪上乘，心脈被瘀血、痰飲、濕濁、寒邪阻滯，導(dǎo)致氣血運(yùn)行不暢而發(fā)生本病。據(jù)此，我們根據(jù)《素問(wèn)》“少火之氣壯”的理論，并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，采用“溫煦元?dú)?，滌痰逐瘀”的治法，篩選了具有溫腎健脾，豁痰開(kāi)竅，活血化瘀的中藥組成了煦少火膠囊。本實(shí)驗(yàn)顯示：煦少火膠囊能明顯降低AS家兔血清TC、TG、LDL、ET、TXB2等含量，升高HDL、NO、6-Keto-PGF1a等水平，從而有效地減少脂質(zhì)沉著、縮小斑塊面積，保護(hù)動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，抑制