腺病毒介導的內皮抑素與中藥組方對關節(jié)炎大鼠抗血管新生的實驗研究.pdf

1、目的：研究重組腺病毒介導的人內皮抑素(recombinantadenovirusmediatinghumanendostatin，rAD-ES)與中藥組方對大鼠Ⅱ型膠原誘導型關節(jié)炎(collagentypeⅡ-inducedarthritis，CIA)的血管新生及炎癥的影響。 研究對象：SD大鼠方法：首先，通過將帶有綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)基因的重組腺病毒(rAD-GFP-ES)感染

2、HEK-293A細胞進行病毒擴增，并在熒光顯微鏡下借助GFP進行監(jiān)控和篩選，收獲病毒，采用超速離心法純化病毒。用紫外分光光度法檢測重組腺病毒的滴度。 然后，用Ⅱ型膠原和完全弗氏佐劑(completeFreund'sAdjuvant，CFA)共同建立CIA模型，自造模次日開始分別給予治療組rAD-GFP-ES(1×1011pfu·kg-1·week-1×4week)與中藥組方(40g·kg-1·day-1×4weeks)，模型對照

3、組分別給予等量的磷酸鹽緩沖液(phosphatebufferedsaline，PBS)和對照病毒(rAD-GFP)，非模型組分別給予等量的rAD-GFP-ES和rAD-GFP。各組大鼠每周進行一次AI評分，于造模第四周處死大鼠取膝關節(jié)進行常規(guī)病理和免疫組織化學檢測其滑膜的微血管密度(microvesslesdensity,MVD)，心臟采血分離血清進行WesternBlot檢測大鼠體內內皮抑素(endostatin，ES)、血管內皮細胞

4、生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、基質金屬蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase，MMP-3)的表達并計算相對含量。 結果：1、純化后的rAD-GFP-ES和rAD-GFP滴度分別為：6.6×1012pfu·mL-1，4.8×1012pfu·mL-1；OD260nm/OD280nm均＞1.3，病毒滴度及純度均可滿足實驗需要。 2、感染rAD-GFP-

5、ES的大鼠血清中ES獲得了穩(wěn)定的表達，其濃度是正常大鼠血清含量的2.4倍。 3、感染rAD-GFP-ES與中藥組方對AI評分的影響rAD-GFP-ES治療組的AI評分明顯低于模型組，中藥組方也能降低AI評分，但其程度不如rAD-GFP-ES治療組顯著。 4、感染rAD-GFP-ES與中藥組方對CIA大鼠滑膜血管新生的影響CIA模型大鼠的滑膜組織增生，新生血管數(shù)目明顯增加；rAD-GFP-ES可以使滑膜新生血管數(shù)目明顯減少

6、，同時能降低VEGF和MMP-3的表達；中藥組方對滑膜MVD有輕度影響，但無統(tǒng)計學意義，能明顯抑制VEGF的表達，而對MMP-3沒有明顯影響。 結論：1、通過rAD-GFP-ES注射可使ES基因在大鼠體內獲得穩(wěn)定表達。 2、感染rAD-GFP-ES能明顯降低模型大鼠的AI評分。 3、VEGF和MMP-3共同促進CIA大鼠滑膜血管新生和炎癥的形成和發(fā)展，rAD-GFP-ES可能通過抑制VEGF和MMP-3的表達而發(fā)