早期宮頸癌淋巴轉移分子機制研究及其預測概率模型的建立.pdf

1、目的：進行早期宮頸癌532例的回顧性分析，研究宮頸癌轉移與其預后因素的關系。利用全基因cDNA微陣列(基因芯片技術)篩查早期宮頸鱗癌(SquamousCervicalCarcinoma，SCC)淋巴結轉移相關基因，系統(tǒng)分析差異表達基因與早期宮頸鱗癌淋巴結轉移的運動、黏附水解及新生血管生成的關系。進一步從基因(mRNA)水平和蛋白水平檢測黏附分子、基質金屬蛋白酶、S100A4在SCC中的表達，探討這些生物大分子在宮頸癌淋巴轉移的黏附、水解

2、過程中的作用機制。建立預測早期SCC淋巴結轉移的概率模型，嘗試對早期預測SCC的淋巴結轉移、判斷預后、尋找個體化治療方案、提高患者的生活質量及抗腫瘤治療提供理論依據(jù)。方法：首先進行了早期宮頸癌532例的回顧性分析，采用多元回歸對其預后因素進行分析。在回顧性分析結論的基礎上，利用cDNA微陣列篩查Ⅰb期SCC轉移相關基因，然后采用反轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，R

3、T-PCT)和免疫組織化學法(Immunohistochemistry，IHC)檢測21例正常宮頸上皮、23例有淋巴結轉移和63例無淋巴結轉移Ⅰb～Ⅱa期SCC中的黏附分子(CD44V6，上皮型鈣黏附素(E-cadherin，E-cad)，整合素αvβ3，整合素α2，間隙連接蛋白43(connexin43，Cx43))，基質金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteasen，MMP：MMP-2、MMP-9及其抑制物(tissuei

4、nhibitorofmetalloproteinase，TIMP)，MMP-7及轉錄因子ETV5，膜型基質金屬蛋白酶1(membranetype1-matrixmetalloproteinase，MT1-MMP))，S100A4鈣結合蛋白的表達情況，分析上述指標與SCC淋巴結轉移的關系、S100A4鈣結合蛋白與各分子之間的相關性及其在SCC中聯(lián)合表達的作用，最后通過應用組織芯片進行早期SCC(Ⅰb～Ⅱa期，轉移63例，無轉移63例)的淋

5、巴結轉移相關因素多元回歸分析，用Logistic逐步回歸法建立預測早期SCC淋巴結轉移的概率模型。 結果：(1)經cDNA微陣列檢測，發(fā)現(xiàn)無淋巴結轉移和有淋巴結轉移SCC組織的差異表達基因9185個，2倍差異表達基因677個，其中在有淋巴結轉移SCC組織中表達上調494個，下調183個，己知基因497個，表達序列標簽(expressedsequencetags，EST)61個。表達增加的基因主要有代謝、發(fā)育、信號傳導傳遞基因等，

6、表達降低的基因主要有發(fā)育、分化、信號傳導傳遞基因等。(2)黏附分子、基質金屬蛋白酶的RT-PCR、IHC結果經統(tǒng)計學分析，CD44v6，E-cad，整合素αvβ3，整合素α2，Cx43，MMP-2，MMP-9，TIMP-1，TIMP-2，MMP-7，ETV5，MT1-MMP，S100A4鈣結合蛋白在無淋巴結轉移和有淋巴結轉移的SCC組織的表達有顯著差異(P＜0.05)，其中E-cad、Cx43、TIMP-1、TIMP-2在有轉移SCC為

7、表達下降，其余為表達上升。(3)SCC中S100A4鈣結合蛋白與整合素αvβ3、整合素α2、MMP-2、MMP-9的表達之間有明顯的正相關性(P＜0.05)。(4)對10項可能影響SCC淋巴結轉移的相關指標進行Logistic逐步回歸分析，結果發(fā)現(xiàn)年齡、臨床分期、腫瘤大小、癌栓、MMP-9所對應的回歸系數(shù)無顯著意義而排除，而E-cad、整合素αvβ3、TIMP-1、MMP-7、S100A4所對應的回歸系數(shù)有顯著意義而進入概率模型?？梢奅

8、-cad、整合素αvβ3、TIMP-1、MMP-7、S100A4可能是影響早期SCC淋巴結轉移的主要因素。 結論：：(1)回顧性分析發(fā)現(xiàn)，早期宮頸癌淋巴轉移是其預后的主要因素，與患者的生存率密切相關。(2)cDNA全基因表達芯片結果表明早期宮頸癌淋巴轉移涉及了多個生物學過程，進一步可以推斷早期SCC的淋巴轉移是一個多基因、多階段過程，與癌細胞的運動、黏附水解、血管生成有關。(3)黏附分子(CD44V6，E-cad，整合素αvβ3

9、，整合素α2，Cx43)、基質金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9及TIMP，MMP-7，MT1-MMP)、ETV5、S100A4鈣結合蛋白在早期SCC中的表達與淋巴結轉移有關，分別參與了早期SCC細胞的黏附力的改變和基質降解，在SCC的侵襲轉移中發(fā)揮了重要的作用。S100A4鈣結合蛋白與整合素αvβ3、整合素α2、MMP-2、MMP-9在早期SCC淋巴結轉移中的表達有明顯的正相關性，說明它們之間在促進SCC淋巴結轉移中存在內在關聯(lián)性，進