引發(fā)醫(yī)院感染表皮葡萄球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)菌素B（MLS-,B-）耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、表皮葡萄球菌(以下簡(jiǎn)稱表葡菌)是引發(fā)醫(yī)院感染的重要致病菌，已得到人們的廣泛關(guān)注。為進(jìn)一步深入了解引發(fā)醫(yī)院感染的表葡菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)菌素B(MLSB)的耐藥機(jī)制，本研究收集了2003～2004年北京3家綜合性醫(yī)院126株引發(fā)醫(yī)院感染的表葡菌，檢測(cè)了紅霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、克拉霉素(CLR)、頭孢西丁(FOX)和喹奴普丁/達(dá)福普丁對(duì)這些菌株的最小抑菌濃度(MIC)；用D試驗(yàn)區(qū)分誘導(dǎo)型(iMLSB)和泵出型(MS)耐

2、藥菌株；采用PCR法對(duì)耐藥基因ermA、ermB、ermC、msrA和mecA進(jìn)行了檢測(cè)，并用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)進(jìn)行同源性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)的菌株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類和林可酰胺類抗生素耐藥，但對(duì)喹奴普丁/達(dá)福普丁敏感；結(jié)構(gòu)型(cMLSB)、誘導(dǎo)型(iMLSB)和泵出型(MS)MLSB耐藥菌株分別占73.8％、10.3％和8.7％；在cMLSB中，耐甲氧西林表葡菌(MRSE)占的比例較高，而在iMLSB中甲氧西林敏感株(MSSE)較多

3、；攜帶ermA、ermB和ermC的菌株分別占4.27％、2.6％和80.3％，ermC不僅在MRSE和MSSE中是最常見(jiàn)的耐藥基因，而且在iMLSB型和cMLSB型中也占多數(shù)；所有MS表型的菌株均檢測(cè)出msrA；紅霉素敏感的菌株中沒(méi)有檢測(cè)出相關(guān)耐藥基因；PFGE分析顯示沒(méi)有特異的流行株；當(dāng)相似性系數(shù)為60％時(shí)，所有菌株可分為7型(A～G型)，MLSB耐藥表型相同的菌株分布于A～F型中，沒(méi)有顯著的集中趨勢(shì)，提示本研究所收集的引發(fā)醫(yī)院感染

4、的表葡菌在抗生素的選擇壓力下主要來(lái)源于患者自身的正常菌群，可見(jiàn)MLSB抗生素的使用需謹(jǐn)慎、合理。 表葡菌引發(fā)感染難治性除了抗生素的選擇壓力下耐藥性增加以外，還在于其可形成生物被膜。為了解引發(fā)醫(yī)院感染的表葡菌中ica操縱元的存在與生物被膜的產(chǎn)生的關(guān)系及其對(duì)抗生素敏感性的影響，本研究對(duì)引發(fā)醫(yī)院感染的106株表葡菌，采用定量和定性法檢測(cè)生物被膜的產(chǎn)生，PCR法檢測(cè)ica操縱元基因的存在，并測(cè)量細(xì)菌對(duì)紅霉素(ERY)、氨芐西林(AMP)

5、、頭孢西丁(FOX)、頭孢曲松(CRO)、替考拉寧(TEC)、環(huán)丙沙星(CIP)、四環(huán)素(TCY)、復(fù)方新諾明(SXT)、萬(wàn)古霉素(VAN)的MIC。結(jié)果其中有31.1％檢測(cè)出ica；ica+菌中產(chǎn)膜菌的檢出率高于ica-菌；浮游狀態(tài)下ica+菌株對(duì)紅霉素，頭孢西丁和頭孢曲松的耐藥性高于ica-菌株，但對(duì)氨芐青霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、替考拉寧和復(fù)方新諾明的耐藥率與ica-菌株相似；剛果紅培養(yǎng)平板中添加葡萄糖和NaCl可提高產(chǎn)膜菌的檢出率

6、。 為了解生物被膜內(nèi)細(xì)菌對(duì)紅霉素的耐藥機(jī)制，我們檢測(cè)了紅霉素對(duì)表葡菌浮游菌、重懸浮菌及膜內(nèi)菌的抑制作用。結(jié)果證實(shí)膜內(nèi)菌對(duì)紅霉素的耐藥性較高，但當(dāng)膜內(nèi)菌脫離被膜后(重新懸浮)，其對(duì)紅霉素的敏感性與浮游菌相似，即耐藥性是可逆的；生物被膜滲透模型實(shí)驗(yàn)和電鏡觀察結(jié)果顯示紅霉素可滲透表葡菌生物被膜，但較緩慢；吖啶橙染色可見(jiàn)紅霉素作用下膜內(nèi)菌RNA和DNA的相對(duì)比例減小，生長(zhǎng)速率下降；采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法可檢測(cè)到膜內(nèi)菌(紅霉素作用組

7、和非作用組)agrD和RNAⅢ的表達(dá)明顯高于浮游菌，且紅霉素作用后的表達(dá)高于紅霉素作用前，提示群體效應(yīng)調(diào)節(jié)在紅霉素耐藥性增加中起著重要作用。 為了解表葡菌包裹在生物被膜內(nèi)，其耐藥性的增加是否與外排泵msrA的表達(dá)相關(guān)，我們從野生菌株中克隆了msrA全長(zhǎng)基因，并通過(guò)穿梭載體pBT2將其電轉(zhuǎn)化至限制缺陷菌株金黃色葡萄球菌RN4220，提取質(zhì)粒后再轉(zhuǎn)化S.epidermidis1457(ica+、產(chǎn)膜陽(yáng)性菌)，得到S.epidermi