E64D對缺氧缺血性腦損傷后海馬中凋亡、自噬、壞死三種蛋白分子表達的影響.pdf

1、目的：通過凋亡-自噬-壞死途徑探討缺氧缺血對新生大鼠海馬神經元的損傷，以及外源性E64D對腦損傷可能的保護作用。
　　 方法：7日齡新生大鼠分三組：假手術組(A組)：僅分離出左側頸總動脈，不予結扎，不予低氧處理，與C組同時腹腔注射同等體積的1％DMSO溶液。HIBD模型組(B組)：予以結扎左側頸總動脈和低氧處理，與C組同時腹腔注射同等體積的l％DMSO。E64D治療組（C組）：HIBD建模后1小時每只SD大鼠給予腹腔注射E64D

2、，劑量lOug/0.1ml。
　　 1．應用免疫印跡法（WesternBlot，WB）檢測新生大鼠海馬中Activedcaspase-3、Beclin-1、SpectrinαⅡ(C-3)降解產物三種蛋白分子在0h、2h、6h、12h、24h、48h的表達變化。2．在48h取大腦組織，利用干濕比重法檢測大腦的含水量。3．光鏡下觀察各組大鼠左側腦組織HE染色的病理變化。
　　 結果：1．HIBD模型組中Activedcasp

3、ase-3蛋白在建模后12h開始明顯表達，至24h達到高峰，隨后逐漸降低。12h、24h、48h蛋白水平較假手術組表達升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。E64D治療組中蛋白水平下降僅在24h的時候與模型組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。2．HIBD模型組中Beclin-1蛋白在建模后6h開始明顯表達，至12h達到高峰，隨后逐漸降低。各時間點蛋白表達水平較假手術組升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。E64D治療組6h、12h、

4、24h、48h的蛋白表達水平較模型組下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。3、HIBD模型組中SpectrinaⅡ降解產物在模型建立后2h即開始增高，持續(xù)升高至48小時。各時間點蛋白表達水平較假手術組升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。E64D治療組2h、6h、12h的蛋白表達水平較模型組下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4．HIBD模型組左側大腦含水量較假手術組增加，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)；E64D治療組與HIB