Pdx1激活Ngn3和Pax6誘導iPS細胞向胰島β細胞分化的作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　探討胰十二指腸同源盒基因-1(pancreatic and duodenal homeobox factor1，Pdx1)在誘導多潛能干細胞（induced pluripotent stem cell，iPSCs）分化為胰島樣β細胞中的作用及其機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞來源的iPSCs，利用小分子化合物將該iPSCs定向誘導分化20天；在這20d時期內，每2天運用實時聚合酶鏈反應（Re

2、al Time-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）方法檢測胰島素相關基因MafA、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1的表達情況；RT-PCR比較誘導前后Pdx1、神經元素3（neurogenin3，Ngn3）與成對盒基因6（paired box gene6，Pax6）幾大重要轉錄因子的表達情況；染色質免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitatio

3、n，ChIP）實驗檢測胰島β細胞發(fā)育過程最重要的轉錄因子 Pdx1結合啟動子區(qū)域的具體位點。
　　結果：
　　體外成功培養(yǎng)人皮膚來源的iPSCs；在誘導分化的20d之內，胰島素相關基因MafA、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈現不同程度的表達增強，并在第20d時表達基本達到高峰；iPSCs經小分子化合物分步誘導后，實驗組轉錄因子Pdx1、Ngn3與Pax6表達較對照組明顯增強；C