Pdx1激活Ngn3和Pax6誘導(dǎo)iPS細(xì)胞向胰島β細(xì)胞分化的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討胰十二指腸同源盒基因-1(pancreatic and duodenal homeobox factor1，Pdx1)在誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cell，iPSCs）分化為胰島樣β細(xì)胞中的作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞來(lái)源的iPSCs，利用小分子化合物將該iPSCs定向誘導(dǎo)分化20天；在這20d時(shí)期內(nèi)，每2天運(yùn)用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（Re

2、al Time-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）方法檢測(cè)胰島素相關(guān)基因MafA、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1的表達(dá)情況；RT-PCR比較誘導(dǎo)前后Pdx1、神經(jīng)元素3（neurogenin3，Ngn3）與成對(duì)盒基因6（paired box gene6，Pax6）幾大重要轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況；染色質(zhì)免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitatio

3、n，ChIP）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰島β細(xì)胞發(fā)育過(guò)程最重要的轉(zhuǎn)錄因子 Pdx1結(jié)合啟動(dòng)子區(qū)域的具體位點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　體外成功培養(yǎng)人皮膚來(lái)源的iPSCs；在誘導(dǎo)分化的20d之內(nèi)，胰島素相關(guān)基因MafA、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈現(xiàn)不同程度的表達(dá)增強(qiáng)，并在第20d時(shí)表達(dá)基本達(dá)到高峰；iPSCs經(jīng)小分子化合物分步誘導(dǎo)后，實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)錄因子Pdx1、Ngn3與Pax6表達(dá)較對(duì)照組明顯增強(qiáng)；C