糖尿病大鼠腦缺血再灌注后皮質(zhì)區(qū)microRNA-155及VEGF、KDR、CD31的表達及意義.pdf

1、目的:探討microRNA-155及VEGF、KDR、CD31在糖尿病大鼠腦缺血再灌注后皮質(zhì)區(qū)的表達及意義。
　　方法:取72只雄性SD大鼠,隨機分為3組:假手術(shù)組(Sham組)、腦缺血再灌注組(Normal glucose cerebral ischemia/reperfusion group,NG組)、糖尿病腦缺血再灌注組(Hyperglycemia cerebral ischemia/reperfusion group,HG

2、組)。大鼠經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型,繼而通過改良Zea-Longa栓線法建立局灶性腦缺血再灌注模型。于缺血2h后再灌注24h對各組大鼠進行神經(jīng)功能缺損評分,TTC(Triphenylte-trazolium chloride,氯化三苯基四氮唑)染色測定梗死面積,HE染色觀察病理改變,TUNEL(Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated

3、dUTP nick end labeling,末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記技術(shù))法檢測凋亡細胞數(shù)目,免疫組化染色檢測CD31表達,實時熒光定量PCR(Real-time PCR,qPCR)檢測microRNA-155、VEGF mRNA及KDR mRNA的表達,Western-Blot法檢測VEGF、KDR蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　(1)神經(jīng)功能缺損評分:HG組神經(jīng)功能缺損評分為3.83±0.31,N

4、G組為2.33±0.21, Sham組為0.00±0.00。與Sham組相比,HG組及NG組神經(jīng)缺損評分明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與NG組相比,HG組神經(jīng)缺損評分明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(2)梗死面積比值:HG組梗死面積為45.08±1.14,NG組為26.21±1.37,Sham組為0.00±0.00。與Sham組相比,HG組及NG組梗死面積比值明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05

5、);與NG組相比,HG組梗死面積比值明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(3)神經(jīng)細胞凋亡指數(shù):HG組為24.50±1.34％,NG組為13.00±0.37%,Sham組為2.50±0.56%。與Sham組相比,HG組及NG組細胞凋亡指數(shù)明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與NG組相比,HG組細胞凋亡指數(shù)明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(4)CD31的表達:免疫組化染色計算CD31免疫

6、陽染數(shù)目:HG組為20.83±3.43, NG組為33.67±1.23,Sham組為5.00±0.58。與Sham組相比,HG組及NG組CD31表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而與NG組比較,HG組的CD31表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(5) qPCR和Western bolt分別檢測VEGF的相對表達量:qPCR檢測基因的相對表達量分別為:HG組為4.74±0.54,NG組為6.71±0

7、.91,Sham組為1.33±0.09。與Sham組比較,HG組及NG組VEGF mRNA表達明顯上調(diào)(P<0.05);其中,與NG組相比,HG組的 VEGF mRNA的表達明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Western-Blot檢測蛋白相對表達量為:HG組為0.99±0.13,NG組為1.55±0.23,Sham組為0.36±0.04。與Sham組相比,HG組及NG組的VEGF蛋白表達明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

8、5);與NG組相比,HG組VEGF蛋白表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(6) qPCR和Westren blot分別檢測KDR的相對表達量: qPCR檢測基因的相對表達分別為:HG組為4.06±0.60,NG組為6.16±0.96,Sham組為1.33±0.09。與Sham組比較,HG組及NG組KDR mRNA表達明顯上調(diào)(P<0.05);其中,與NG組相比, HG組的KDR mRNA的明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)

9、意義(P<0.05)。Western-Blot檢測蛋白相對表達量為:HG組為0.28±0.01,NG組為0.58±0.08,Sham組為0.13±0.03。與Sham組相比,HG組及NG組的KDR蛋白表達明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與NG組相比,HG組KDR蛋白表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(7) qPCR檢測 microRNA-155的相對表達量: HG組為9.38±0.69,NG組為5.

10、67±0.52,Sham組為1.36±0.07。與 Sham組比較,HG組及 NG組 microRNA-155表達明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與NG組相比,HG組microRNA-155表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.VEGF信號通路參與了糖尿病加重腦缺血再灌注損傷過程,VEGF及其受體KDR的低表達可能是糖尿病加重腦缺血再灌注損傷的機制之一;
　　2. Micro