IL-6激活A(yù)TM-NF-κB通路致肺癌細胞化療耐藥的作用研究.pdf

1、已有研究表明，對腫瘤的化療可導(dǎo)致ATM(ataxia-telangiectasia mutated，ATM)相關(guān)的腫瘤細胞多藥耐藥(multiple drug resistance，MDR)的產(chǎn)生，而炎癥因子IL-6水平也與MDR的形成密切相關(guān)。但到目前為止，ATM活化在IL-6所引起的MDR形成中的作用仍不明。因此，本實驗主要對IL-6在肺癌細胞中引起MDR的通路機制進行研究。
　　 為探究IL-6和ATM在化療藥所致MDR形

2、成中的作用，我們以NCI-H446和A549細胞為小細胞肺癌和非小細胞肺癌模型，首先觀察NCI-H446和A549細胞對化療藥順鉑和喜樹堿的敏感性，進而采用Western blot、RT-PCR和ELISA檢測兩種細胞系中IL-6的表達差異。其次，采用Western blot、RT-PCR和免疫熒光激光共聚焦檢測IL-6對MDR相關(guān)蛋白ABCG2、Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1表達的影響及ATM/NF-κB的活化情況。再次，使用通

3、路抑制劑，探討IL-6引起MDR的通路機制和IL-6產(chǎn)生的機制。最后，通過細胞活力的檢測，探討ATM/NF-κB抑制劑CGK和BAY11-7082對肺癌細胞化療效果的影響。
　　 實驗結(jié)果顯示:1、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A549細胞中IL-6的表達量是NCI-H446細胞的3.9倍，同時A549細胞對化療藥的敏感性更低。流式結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低表達IL-6的NCI-H446細胞經(jīng)順鉑處理后細胞凋亡率為54.31％，IL-6預(yù)處理組細胞凋亡

4、率則降低至13％，細胞凋亡率下降67.3％。2、在低表達IL-6的NCI-H446細胞中，IL-6預(yù)處理0-120分鐘，可在蛋白水平和mRNA水平上增加耐藥和抗凋亡相關(guān)蛋白的表達，30分鐘左右作用最為明顯。3、低表達IL-6的NCI-H446細胞經(jīng)IL-6的預(yù)處理0-120分鐘后，Western Blot結(jié)果表明，ATM、IκBα和p65磷酸化水平都有所增加，免疫熒光激光共聚焦也得到類似結(jié)果。4、Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ATM

5、激酶抑制劑CGK可減少p65的磷酸化，表明IL-6所致的NF-κB通路的激活依賴于ATM的磷酸化，免疫熒光激光共聚焦也得到類似結(jié)果。同時ATM/NF-κB的激酶抑制劑預(yù)處理可降低IL-6上調(diào)的耐藥和抗凋亡相關(guān)蛋白的表達。5、以順鉑和喜樹堿分別處理NCI-H446細胞24小時和48小時，ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，IL-6的表達分別提高了198％和160.5％。6、Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IL-6可激活p38和NF-κB信號通路，而使用

6、NF-κB和p38信號通路的抑制劑處理NCI-H446細胞后，ELISA結(jié)果顯示，順鉑和喜樹堿所誘導(dǎo)的IL-6表達分別降低了58.1％、28.2％和33.3％、14.2％。7、ATM和NF-κB信號通路激酶抑制劑預(yù)處理NCI-H446細胞，與單獨使用化療藥組相比，NCI-H446細胞活力更低，光鏡觀察結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)BAY11-7082或CGK/BAY11-7082處理后，NCI-H446細胞凋亡更為明顯。
　　 總結(jié)以上實驗結(jié)果