烏頭堿致心律失常的細胞分子機制的實驗研究.pdf

1、附子和烏頭是我國臨床常用的重要中藥。附子的功能是：回陽救逆、補火助陽、散寒除濕、溫中止痛。臨床主要用于陽氣衰微、陰寒內(nèi)盛、四肢厥冷、脈微欲絕之亡陽脫證；腎陽不足所致的腰膝疼痛、形寒肢冷、陽痿遺精、尿頻數(shù)；脾陽不振所致的脘腹冷痛、大便溏泄之證。烏頭主要用于風寒濕痹、周身關節(jié)疼痛屬于寒濕偏勝者。烏頭類生物堿既是烏頭和附子的主要有效成分，又是主要毒性成分。烏頭堿主要毒性作用的靶器官為神經(jīng)系統(tǒng)和心臟系統(tǒng)。烏頭堿的神經(jīng)、心臟及肌肉毒性主要是由于其

2、使電壓依賴型Na<'+>通道向超級去極化的方向位移，從而導致Na<'+>通道的永久激活。烏頭堿的心臟毒性主要表現(xiàn)為惡性心律失常，其心臟毒性(主要是心律失常)的細胞分子機制研究仍未完善，尤其是從心肌細胞興奮一收縮偶聯(lián)系統(tǒng)的鈣信號轉(zhuǎn)導及其調(diào)控角度探討其導致心律失常的機制尚未有人提出，并且此系統(tǒng)中鈣調(diào)控蛋白的功能及相互作用也是當今心律失常分子機制研究的熱點方向。所以本課題從此方向入手，深入揭示烏頭堿致心律失常的細胞分子機制和心律失常發(fā)生的細胞

3、分子機制，有一定的前瞻性和較強的創(chuàng)新性。 本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1 烏頭堿對原代培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細胞的毒性效應 2 烏頭堿對原代培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細胞鈣調(diào)控的影響 3 烏頭堿對原代培養(yǎng)的大鼠乳鼠RyR<,2>基因沉默的心肌細胞鈣調(diào)控的影響 通過實驗研究，我們可以得出了以下結(jié)論： 1．烏頭堿可引起心肌細胞形態(tài)、活力、細胞膜通透性的變化。 2．烏頭堿可引起心肌細胞DNA的

4、損傷。 3．烏頭堿可引起細胞內(nèi)鈣含量的超載，進而引起鈣振蕩的失調(diào)，從而最終引起心肌細胞自發(fā)搏動的紊亂。 4．烏頭堿可導致鈣調(diào)控蛋白RyR<,2>和NCX基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的增加。 5．烏頭堿誘導的鈣信號的紊亂能夠被RyR<,2>的抑制劑釕紅(RR)逆轉(zhuǎn)。 6．烏頭堿可上調(diào)RyR<,2>基因沉默的心肌細胞中RyR<,2>的基因水平和蛋白水平。 7．在RyR<,2>基因沉默的心肌細胞中，烏頭堿可使

5、紊亂的鈣信號在一定程度上恢復正常而不改變細胞內(nèi)相對的鈣含量。 8．在RyR<,2>基因沉默的心肌細胞中，烏頭堿可提高肌漿網(wǎng)鈣釋放含量的增加。 9．在RyR<,2>基因沉默的心肌細胞中，烏頭堿可抑制L-型Ca<'2+>通道電流。 由此可見，烏頭堿通過影響心肌細胞興奮-收縮偶聯(lián)系統(tǒng)中鈣調(diào)控蛋白的表達而引起心肌細胞的鈣穩(wěn)態(tài)失衡。肌漿網(wǎng)鈣釋放通道蛋白(RyR2)功能的改變是烏頭堿作用于心肌細胞的一個重要結(jié)果。烏頭堿導致肌