Lin28與胃癌細(xì)胞化療耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文Lin28與胃癌細(xì)胞化療耐藥關(guān)系的研究姓名：徐潮陽申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：王林波201104浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要及v陀Stemblot技術(shù)檢測Lin28鼢蛆水平及蛋白水平的表達(dá)量。L越8則A水平在四株胃癌細(xì)胞中均有表達(dá)，但是在蛋白水平上沒有表達(dá)。挑選LiIl28蛋白表達(dá)陰性胃癌細(xì)胞SGC7901，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA31Lin28以及對(duì)照空質(zhì)粒pcDNA31，用westembon技術(shù)檢測Li

2、Il28表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染后兩株細(xì)胞分別標(biāo)記為SGC7901／Lin28和SGC7901／mock。用MTT技術(shù)比較轉(zhuǎn)染后兩株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株生長情況，結(jié)果顯示SGC7901／Lill28和SGC7901／mock細(xì)胞生長情況未見明顯差異(P005)。用流式細(xì)胞PI單染技術(shù)比較兩株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株細(xì)胞周期情況未見明顯差異(PO05)。我們用MTT技術(shù)，PI單染流式細(xì)胞技術(shù)以及GiemSa染色凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測SGC7901／Lin28和SGC7

3、90l／mock在化療藥物作用下的凋亡率的差異。M兀細(xì)胞存活率分析結(jié)果提示在化療藥物(順鉑、紫杉醇)的作用下SGC7901／LiI也8細(xì)胞的存活率高于對(duì)照組SGC7901／mock。流式細(xì)胞PI單染技術(shù)檢測顯示在化療藥物(順鉑、紫杉醇)的作用下SGC790l／L砬8細(xì)胞的凋亡率低于對(duì)照組SGC7901／mock(P005)。Giem觀染色凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測結(jié)果顯示在化療藥物(紫杉醇)的作用下SGC7901／Lin28細(xì)胞的凋亡率低于對(duì)照

4、組SGC7901／moCk(P005)。可見Lin28可以在胃癌細(xì)胞中誘導(dǎo)化療耐藥。用siRNA干擾技術(shù)，敲低SGC7901／Lin28細(xì)胞中L砬8表達(dá)量，可以逆轉(zhuǎn)Lill28誘導(dǎo)的耐藥情況。為初步研究Lin28誘導(dǎo)耐藥的機(jī)制，用qImPCR的方法檢測兩組胃癌細(xì)胞SGC790l／Lill28細(xì)胞和SGc7901／mock細(xì)胞中nliRNA(Let7a、Let一7b、Let一7c、miR107)表達(dá)情況。結(jié)果提示：SGC7901／Lin2

5、8中Let一7a、Let7b、Let一7c、nliR—107表達(dá)量比SGC7901／mock明顯下降，用siI礬A感染技術(shù)干擾SGC790l／L砬8中Lill28表達(dá)可以上調(diào)上述miI斟A的表達(dá)。上述結(jié)果提示L砬8可以抑制部分111iI斟A表達(dá)，這可能是L砬8誘導(dǎo)化療耐藥的機(jī)制之一。2Lin28表達(dá)與胃癌新輔助化療后病理反應(yīng)的相關(guān)性分析2004年至2010年我院腫瘤外科胃癌患者接受新輔助化療患者共107例，選取其中本院完整保存有化療前胃