組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A對豬卵巢顆粒細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、顆粒細(xì)胞是卵巢中十分重要的體細(xì)胞,其在發(fā)育的不同階段合成和分泌激素以及多種生長因子,并通過自分泌或旁分泌途徑發(fā)揮作用。顆粒細(xì)胞對卵母細(xì)胞成熟、卵泡發(fā)育有至關(guān)重要的作用。顆粒細(xì)胞的凋亡是導(dǎo)致卵泡閉鎖的很重要的原因。如果一個發(fā)育卵泡中10％以上的顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡,則表明該卵泡已經(jīng)或正在閉鎖。曲古抑菌素A是一種重要的組蛋白去乙?；敢种苿?近年來研究發(fā)現(xiàn),其對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用,作用機理包括誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期和促進細(xì)胞分化等

2、。組蛋白去乙酰化酶抑制劑作為一種非常有前景的抗腫瘤藥物,其對機體正常細(xì)胞的作用尚待研究。因此,本試驗以TSA為代表藥物,研究組蛋白去乙?；敢种苿ωi卵巢顆粒細(xì)胞的作用,并就其機理作初步探討,以為臨床用藥提供一定的參考。具體研究內(nèi)容如下。
　　 采用MTT法測定組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA對豬卵巢顆粒細(xì)胞活性的影響。結(jié)果顯示:TSA在低濃度時(10ng/mL以下)對豬卵巢顆粒細(xì)胞的生長沒有影響,但隨著藥物濃度的增加,豬卵巢顆粒細(xì)

3、胞的生長受到抑制(P<0.05),且這種抑制作用具有劑量依賴性。在10ng/mL和200ng/mL,時,隨著處理時間的延長,在48h時略有升高,而在72h時又降低,但各時間點測定的OD550值差異不顯著(P>0.05),表明TSA對豬卵巢顆粒細(xì)胞生長抑制不具有時間依賴性。
　　 利用間接免疫熒光研究組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA對正常豬卵巢顆粒細(xì)胞乙?；降挠绊?并利用熒光定量PCR技術(shù)從分子水平對機制做進一步研究。間接免疫熒光

4、結(jié)果顯示,200 ng/mL TSA處理的顆粒細(xì)胞與對照組比較組蛋白H3乙酰化水平變化顯著,而在低濃度下(10 ng/mL)變化不顯著。熒光定量PCR結(jié)果顯示,200ng/mLTSA處理24h,Hadc-1、Hadc-3和p300 mRNA表達與空白對照組比較差異顯著(P<0.05),在低濃度(10 ng/mL)時,差異不顯著(P>0.05)。表明TSA在較高濃度下影響正常顆粒細(xì)胞的乙?；?而在低濃度下對顆粒細(xì)胞乙酰化水平不產(chǎn)生影響

5、。
　　 采用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度曲古抑菌素A(TSA)作用于顆粒細(xì)胞24h后,顆粒細(xì)胞凋亡率的變化,以確定凋亡是否為TSA作用后顆粒細(xì)胞生長抑制的機制。結(jié)果顯示:200ng/m TSA處理組的細(xì)胞凋亡率為13.7％,高于空白對照組9.1％,差異顯著(P<0.05)；10ng/mL處理組與空白對照相比,凋亡率無明顯差異(P>0.05),表明高濃度TSA促進顆粒細(xì)胞活性凋亡,細(xì)胞凋亡是顆粒細(xì)胞活性的影響方式之一。
　　

6、采用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度曲古抑菌素A(TSA)作用于顆粒細(xì)胞24h后,顆粒細(xì)胞周期的變化情況,并利用熒光定量RT-PCR技術(shù)從分子水平對細(xì)胞周期相關(guān)基因進行研究。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:與空白對照組相比,200 ng/mL TSA處理24 h后,G0/G1期細(xì)胞百分比有明顯的上升(P<0.05),S期細(xì)胞百分比顯著降低(P<0.05),G2/M期細(xì)胞百分比差異不顯著。而低濃度(10 ng/mL)處理各期細(xì)胞百分比無明顯變化。同樣,熒光定量