產(chǎn)低溫脂肪酶菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、脂肪酶是一類能催化長(zhǎng)鏈甘油三酸酯水解反應(yīng)的酶。由于酶技術(shù)的快速發(fā)展，生物脂肪酶得到了廣泛的關(guān)注。脂肪酶是一類重要的生物催化劑，在生物技術(shù)方面有廣泛的應(yīng)用。目前工業(yè)上應(yīng)用的脂肪酶大多是中溫和高溫脂肪酶。低溫脂肪酶由于具有低溫高催化活性等特點(diǎn)，在食品、洗滌、制藥、脂類加工等方面有著巨大的應(yīng)用潛力。本文的目的在于篩選出產(chǎn)低溫脂肪酶活力更高的菌株，為今后生產(chǎn)上的應(yīng)用提供出發(fā)菌株，供誘變、基因克隆等研究用。取得成果如下： 1．篩選得到80

2、余株產(chǎn)脂肪酶菌株。 作者從成都及周邊地區(qū)汽車修理廠，機(jī)油廠、植物油廠、餐廳、菜市場(chǎng)等富含油脂的土壤中，用溴甲酚紫平板篩選得到80余株產(chǎn)脂肪酶的菌株，其中大部分酶活在10-20u/ml范圍內(nèi)。 2．篩選得到產(chǎn)低溫脂肪酶的高產(chǎn)菌株060805。 挑選其中9株酶活較高的菌株，對(duì)它們的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步研究。菌株060805和090902兩株為產(chǎn)低溫脂肪酶菌株，但是由于菌株060805酶活最高，因此選擇該株做進(jìn)一步研究。

3、 3．經(jīng)過(guò)系統(tǒng)鑒定，確定菌株060805為短波單胞菌(Brevundimonas)。 菌株060805革蘭氏染色陰性，菌落呈橙色、圓形、隆起、不透明、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊。 電鏡觀察呈短桿狀，單鞭毛，接觸酶和氧化酶陽(yáng)性，不產(chǎn)生吲哚，不產(chǎn)生脂酶(吐溫—80)，不液化明膠，只發(fā)酵麥芽糖。 經(jīng)16s rDNA序列比對(duì)，060805菌株與短波單胞菌屬(Brevundimonas)的16S rRNA/rDNA序列

4、一致性達(dá)到98％以上。因此確定菌株060805為短波單胞菌，并命名為Brevundimonas sp.060805。 4．在國(guó)內(nèi)首次報(bào)道了短波單胞菌具有產(chǎn)低溫脂肪酶的能力。 5．建立優(yōu)化了菌株060805的發(fā)酵條件。 對(duì)菌株Brevundimonas sp.060805的液體發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，確定其最適發(fā)酵培養(yǎng)基碳源為葡萄糖，氮源為蛋白胨，Mg<'2+>濃度為0.05％，發(fā)酵溫度為28℃，發(fā)酵pH為7.0。按1.

5、5％接種量接種于最適發(fā)酵培養(yǎng)基中28℃，200rpm，發(fā)酵48h，酶活達(dá)到23.64u/ml。 6．初步確定了菌株060805的酶學(xué)特性。 對(duì)菌株Brevundimonas sp.060805所產(chǎn)的脂肪酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究，該酶最適反應(yīng)溫度為35℃，最適pH為6.0，屬于低溫酸性脂肪酶。該酶具有較好的熱穩(wěn)定性，在60℃下處理60min酶活力基本不變。 本文首次報(bào)道了短波單胞菌可以產(chǎn)低溫脂肪酶，并對(duì)其產(chǎn)酶條件及酶學(xué)特