嚴(yán)重燙傷早期主要臟器自噬變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:自噬是真核細(xì)胞內(nèi)通過單層或雙層膜包裹待降解物形成自噬體，而后與溶酶體結(jié)合形成自噬溶酶體對(duì)包裹物進(jìn)行降解，降解產(chǎn)物被細(xì)胞再循環(huán)利用的過程。它是真核細(xì)胞適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)或生長(zhǎng)因子缺乏、低氧、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等有害刺激所發(fā)生的一種應(yīng)激反應(yīng)，生理狀態(tài)下參與維持蛋白代謝平衡、細(xì)胞和機(jī)體的自身穩(wěn)態(tài)。嚴(yán)重?zé)齻髾C(jī)體啟動(dòng)全身應(yīng)激系統(tǒng)及應(yīng)答反應(yīng)，從而引起機(jī)體固有生理反應(yīng)失衡和一系列炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激損傷、免疫功能改變等病理變化，同時(shí)牽涉各重要臟器結(jié)構(gòu)和功能的變化

2、，嚴(yán)重者可誘發(fā)多器官功能不全綜合癥(MODS)等。自噬作為不同于細(xì)胞壞死和凋亡的第三種細(xì)胞死亡方式——自噬性細(xì)胞死亡，是否參與嚴(yán)重?zé)齻碳に鸬囊幌盗胁±砩碜兓渴欠裨趪?yán)重?zé)齻笈K器的結(jié)構(gòu)與功能的變化中發(fā)揮著怎樣的作用？就目前的研究資料而言，這些問題的答案尚未不清楚。因此，本課題旨在通過研究嚴(yán)重?zé)齻∈髠笤缙诓煌瑫r(shí)間點(diǎn)時(shí)主要臟器自噬水平的變化，初步闡明嚴(yán)重?zé)齻缙诟髦饕K器自噬水平變化規(guī)律，為深入研究嚴(yán)重?zé)齻笈K器功能損害的發(fā)生機(jī)

3、制與防治措施提供新的思路。
　　方法:1.以BALB/C小鼠為研究對(duì)象，建立30％TBSA的Ⅲ度燙傷模型，分別于燙傷前（正常對(duì)照）及燙傷后1h、2h、6h、12h、24h采集小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標(biāo)本。2.提取各時(shí)相點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標(biāo)本總蛋白，用蛋白免疫印跡檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3表達(dá)量及其變化，以反映燒傷后各時(shí)相點(diǎn)不同臟器的自噬相關(guān)分子水平的表達(dá)變化。3.將燙傷小鼠心、肝、肺、腎臟器組織標(biāo)本制

4、備后于透射電鏡下觀察各臟器自噬現(xiàn)象及其變化情況。
　　結(jié)果:1.與傷前相比較，燙傷后1h各臟器Beclin1蛋白表達(dá)即開始有所增加，尤以肝臟增加明顯;隨后均呈現(xiàn)出逐漸緩慢上升趨勢(shì)，多在傷后12h達(dá)高峰。但在傷后24h時(shí)，四種臟器Beclin1蛋白表達(dá)卻出現(xiàn)不同的變化，心臟組織Beclin1表達(dá)繼續(xù)升高，而肝、肺、腎組織Beclin1表達(dá)則較12h明顯回落，但仍高于傷前。2.燙傷后1h四種臟器組織LC3蛋白表達(dá)均較傷前有所增加，以腎

5、臟增加明顯;隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，也大多呈逐漸上升趨勢(shì)，但以腎臟的上升幅度為最大，也多于傷后12h達(dá)高峰。傷后24h時(shí)四種臟器LC3表達(dá)也呈現(xiàn)不同的變化，心臟組織LC3表達(dá)繼續(xù)較12h增加，而肝、肺、腎組織LC3表達(dá)則較12h降低，但仍高于傷前水平。3.透射電鏡觀察燙傷前后心、肝、肺、腎組織細(xì)胞自噬變化的結(jié)果顯示，燙傷后6h時(shí)心、肝、肺、腎組織胞內(nèi)均出現(xiàn)自噬溶酶體增多，明顯多于傷前水平，表明臟器組織細(xì)胞自噬水平增加。
　　結(jié)論:1.嚴(yán)重