熱休克蛋白90與TAK1相互作用調(diào)節(jié)白介素-1β激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo).pdf

1、熱休克蛋白90(Heat shock protein 90，Hsp90)是Hsp90家族成員，進(jìn)化上高度保守，其結(jié)構(gòu)主要由一個(gè)N端高度保守的ATPase結(jié)構(gòu)域，一個(gè)中間結(jié)構(gòu)域以及一個(gè)介導(dǎo)Hsp90二聚化的C端結(jié)構(gòu)域三部分組成。Hsp90是胞內(nèi)廣泛存在的一個(gè)分子伴侶，其底物蛋自主要為一些在細(xì)胞內(nèi)信號通路中起重要作用的類圃醇激素受體、蛋白激酶、轉(zhuǎn)錄因子等。Hsp90特異性抑制劑GA或RAD，能夠通過競爭的結(jié)合到Hsp90 N端的ATP/AD

2、P結(jié)合位點(diǎn)阻斷其分子伴侶功能，從而導(dǎo)致其底物蛋白通過蛋白酶體降解。因此，借助于Hsp90的抑制劑可以進(jìn)一步擴(kuò)大Hsp90的底物范圍。IL-1是一種促炎細(xì)胞因子，主要由LPS刺激的單核/巨嗜細(xì)胞產(chǎn)生，在機(jī)體免疫反應(yīng)和免疫缺陷性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)中具有重要作用。TAK1作為MAPKKK參與IL-1β誘導(dǎo)的信號通路，并對下游MAPKs(JNK和p38)和NF-κB的激活是必需的。蛋白質(zhì)組學(xué)研究

3、表明Hsp90能夠與TAK1相互作用。 我們的研究發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了Hsp90在IL-1β激活的信號級聯(lián)中的新的調(diào)控作用。GA處理后抑制了IL-1β誘導(dǎo)的，TAK1-MAPKs和TAKl-NF-κβ通路的激活，從而導(dǎo)致炎癥相關(guān)蛋白COX-2表達(dá)的減少。利用RNA干擾手段下調(diào)內(nèi)源Hsp90的蛋白水平后，我們也得到了相同的結(jié)果。此外，T6RZC穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系可以通過Coumermycin A誘導(dǎo)T6RZC二聚化，從而模擬IL-1β激活的胞

4、內(nèi)信號級聯(lián)，以避開Hsp90分子伴侶復(fù)合物對TAK1上游激酶IRAK-1的調(diào)節(jié)作用對MAPKs和NF-κβ激活的影響。在T6RZC穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中，GA明顯抑制了JNK、p38 MAPKs的磷酸化和IκB的降解。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Hsp90能夠在體內(nèi)與TAK1發(fā)生相互作用，Hsp90的氨基端1-401位氨基酸介導(dǎo)了兩者的結(jié)合。Hsp90的抑制劑能夠在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)內(nèi)源TAK1的表達(dá)而不影響其mRNA水平，并且GA處理后TAK1蛋白的降