DAZL基因啟動子活性初步分析及其誘導(dǎo)劑的篩選、驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、國家自然科學(xué)基金資助項目(No31272429)NationalNaturalScienceFoundationofChina(No31272429)江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目AProjectFundedbythePriorityAcademicProgramDevelopmentofJiangsuHigherEducationInstitutionsIl揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文熒光素酶報告基因載體pGL3／893、pGL3／608、

2、pGL3／334、pGL3／147，將其分別轉(zhuǎn)染GCl細(xì)胞和DF1細(xì)胞，利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)鑒定了蘇禽黃雞DAZL基因核心啟動子區(qū)，結(jié)果表明382186bp之間存在著對DAZL基因有重要作用的調(diào)控元件。2重亞硫酸鹽測序法測定了蘇禽黃雞DAZL基因5’側(cè)翼區(qū)一932~39bp片段序列的甲基化程度。在雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，通過添加DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5azacytidine)，檢測各雙熒光素酶報告基因載體活性變

3、化，進(jìn)而分析DNA甲基化對其啟動活性和表達(dá)的影響。同時，添加不同DAZL基因常用誘導(dǎo)劑后檢測雙熒光素酶報告基因載體的活性變化以比較這些常用誘導(dǎo)劑對雞DAZL基因的誘導(dǎo)效率，結(jié)果顯示，誘導(dǎo)劑AmS0、ATRA和誘導(dǎo)劑組合FSHE2對雞DAZL基因啟動子活性誘導(dǎo)效果較佳。3在小鼠DAZL基因啟動子上驗證了RA、ATRA等常用誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)效果。參照蘇禽黃雞DAZL基因啟動子誘導(dǎo)劑篩選實驗的基本思路，進(jìn)一步驗證所篩選誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)效率，結(jié)果顯示A

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