結(jié)腸癌前哨淋巴結(jié)定位檢測(cè)及其微轉(zhuǎn)移與FGFR4基因多態(tài)性的關(guān)系.pdf

1、結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，到目前為止公認(rèn)的最有效治療方法是以根治性手術(shù)切除為基礎(chǔ)的綜合治療。但是結(jié)腸癌的預(yù)后仍然較差，手術(shù)后總的5年生存率仍徘徊在50％左右。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況是結(jié)腸癌最重要的預(yù)后因素之一，對(duì)評(píng)估預(yù)后和選擇術(shù)后綜合治療方案等起著極其重要的作用。 目前研究認(rèn)為，癌基因和/或抑癌基因改變是決定癌癥發(fā)生的重要因素，而基因多態(tài)性可能與不同個(gè)體對(duì)癌癥易感性及預(yù)后多樣性有關(guān)。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4(fibroblastgr

2、owthfactorreceptor-4，F(xiàn)GFR4)在胚胎組織、乳腺癌、胰腺癌和腎癌等組織中有較高表達(dá)，而在正常結(jié)腸組織內(nèi)無(wú)表達(dá)。在乳腺癌，F(xiàn)GFR4基因第388位密碼子第一個(gè)堿基的單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，SNPs)與乳腺癌患者預(yù)后等密切相關(guān)；FGFR4蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及FGFR4基因多態(tài)性與結(jié)腸癌預(yù)后的關(guān)系等尚未進(jìn)行深入細(xì)致的研究，它與淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系等亦未見研究報(bào)道。

3、 目的：1.探討能否將SLN定位檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于結(jié)腸癌；SLN能否較正確地反映結(jié)腸癌在區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移狀況；SLN術(shù)中定位檢測(cè)對(duì)結(jié)腸癌的治療有無(wú)指導(dǎo)意義。 2.研究結(jié)腸癌在區(qū)域淋巴結(jié)和SLN內(nèi)的轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移有何不同，探討準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法和臨床意義。 3.研究結(jié)腸癌組織和正常結(jié)腸粘膜組織FGFR4蛋白表達(dá)水平；探討FGFR4蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 4.檢測(cè)結(jié)腸癌患者FGFR4基因編碼

4、蛋白質(zhì)的第1217號(hào)堿基的多態(tài)性分布情況及其與正常人群分布的差別；研究FGFR4基因SNPs與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的關(guān)系；并初步探討其相互關(guān)聯(lián)的本質(zhì)。 方法：選擇2003年3月至2004年8月在第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院普外科和蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院干部病房外科住院治療的結(jié)腸癌患者68例，男43例，女25例，年齡34歲～86歲，平均年齡60.8歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為局部無(wú)廣泛性粘連、無(wú)結(jié)腸梗阻、未曾行結(jié)腸切除術(shù)、腹腔內(nèi)無(wú)種植性轉(zhuǎn)移、僅就“結(jié)腸

5、”而言可做根治性切除的結(jié)腸癌患者。以染料法進(jìn)行術(shù)中SLN定位：充分顯露腫瘤所在的結(jié)腸段后，于腫瘤周圍的結(jié)腸漿膜下分4點(diǎn)用細(xì)針頭注射1％專利藍(lán)溶液5ml，5min內(nèi)按照綠染淋巴管的走向追尋在不同方向上第一個(gè)被綠染的淋巴結(jié)，即為SLN。術(shù)后仔細(xì)找尋標(biāo)本內(nèi)的所有淋巴結(jié)，SLN單獨(dú)分裝。所有淋巴結(jié)應(yīng)用常規(guī)HE染色和抗CEA、CK20免疫組化染色進(jìn)行詳細(xì)檢測(cè)。應(yīng)用WesternBlot法測(cè)定結(jié)腸癌組織和正常結(jié)腸粘膜組織FGFR4蛋白的表達(dá)。抽取5

6、8例結(jié)腸癌患者和32例正常人的外周血，應(yīng)用Taqman探針熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)FGFR4基因第1217位堿基的多態(tài)性分布。 結(jié)果：1.68例患者中有65例SLN定位成功，定位成功率為96％(65/68)，共找出SLN158枚，每例患者的SLN數(shù)量1～4枚，平均為2.4枚(158/65)，SLN數(shù)占全部所屬淋巴結(jié)的13％(158/1，213)。 2.常規(guī)HE染色158枚SLN有34枚發(fā)生轉(zhuǎn)移，SLN陽(yáng)性率為21.5％(3

7、4/158)；在18例患者的SLN中發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移灶，轉(zhuǎn)移率為27.7％(18/65)；患者跳躍性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為3.0％(2/65)。 3.常規(guī)HE染色檢查，發(fā)現(xiàn)非SLN區(qū)域淋巴結(jié)有57枚陽(yáng)性，陽(yáng)性率為5.4％(57/1，055)。其中有5例患者的SLN檢測(cè)為陰性，但非SLN區(qū)域淋巴結(jié)陽(yáng)性，SLN檢測(cè)的假陰性率為11.9％(5/42)。 4.結(jié)腸癌在SLN的轉(zhuǎn)移率明顯高于在區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移率(P＜0.001)；亦明顯

8、高于在非SLN區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移率(P＜0.001)。SLN對(duì)結(jié)腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性預(yù)測(cè)率為78.3％(18/23)。 5.在HE染色為陰性的124枚SLN中，有50枚抗CEA免疫組化染色陽(yáng)性，SLN內(nèi)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為40.3％(50/124)。用免疫組化法僅檢測(cè)SLN，原來50例HE染色未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中27例檢出有微轉(zhuǎn)移存在，本組患者微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為39.7％(27/68)，與HE染色相比P＜0.001。

9、6.微轉(zhuǎn)移在非SLN區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)的發(fā)生率僅為2.1％(21/998)，僅有非SLN區(qū)域淋巴結(jié)有微轉(zhuǎn)移的患者所占的比例僅為2.9％(2/68)，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)SLN微轉(zhuǎn)移的假陰性率為8.7％(2/23)。 7.結(jié)腸癌患者癌組織內(nèi)FGFR4蛋白表達(dá)率為47.1％(32/68)，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者癌組織內(nèi)FGFR4表達(dá)率為55.3％(26/47)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)率為28.6％(6/21)，二者有顯著性差別(P=0.041)。正

10、常結(jié)腸粘膜無(wú)FGFR4蛋白表達(dá)。 8.人群中存在有FGFR4基因第1217位堿基C→T轉(zhuǎn)換。30例正常人中有13例FGFR4基因第1217位堿基表現(xiàn)為C純合子，占43.3％(13/30)；14例為C/T雜合子，占46.7％(14/30)；3例為T純合子，占10.0％(3/30)。53例結(jié)腸癌患者中有22例FGFR4基因第1217位堿基表現(xiàn)為C純合子，占41.5％(22/53)；27例為C/T雜合子，占50.9％(27/53)；4

11、例為T純合子，占7.6％(4/53)。正常人群與結(jié)腸癌患者相比，F(xiàn)GFR4基因第1217位堿基SNPs分布無(wú)顯著性差異。 9.FGFR4基因第1217位堿基為T純合子和C/T雜合子的患者容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.008，P=0.033)。T純合子患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100％(4/4)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為25.0％(1/4)；C/T雜合子患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為81.5％(22/27)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為11.1％(3/27)；而C純

12、合子患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為50％(11/22)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為4.5％(1/22)。 結(jié)論：1.對(duì)結(jié)腸癌患者進(jìn)行術(shù)中染料法定位SLN的方法簡(jiǎn)單，成功率高，可以在臨床上推廣應(yīng)用；HE染色SLN的陽(yáng)性率明顯高于其他區(qū)域淋巴結(jié)，應(yīng)用SLN預(yù)測(cè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況具有明顯的代表性。 2.對(duì)結(jié)腸癌SLN進(jìn)行術(shù)中定位，可以指導(dǎo)確定手術(shù)范圍，以達(dá)到更合理的根治性切除；重點(diǎn)檢測(cè)SLN，能在不降低診斷質(zhì)量的前提下明顯減輕病理科醫(yī)生的工作量和患者

13、的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。 3.免疫組化染色是檢測(cè)SLN微轉(zhuǎn)移的有效方法之一；對(duì)SLN微轉(zhuǎn)移檢測(cè)可以提高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率，使對(duì)結(jié)腸癌的臨床病理分期更準(zhǔn)確；SLN微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)結(jié)果對(duì)患者選擇合理的術(shù)后治療方案具有重要參考意義。 4.部分結(jié)腸癌患者的瘤組織內(nèi)有FGFR4蛋白表達(dá)，瘤組織內(nèi)表達(dá)FGFR4蛋白的結(jié)腸癌患者更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 5.結(jié)腸癌患者FGFR4基因第1217位堿基存在一個(gè)C→T轉(zhuǎn)換的SNPs；這一SNPs對(duì)結(jié)腸