CD20分子模擬表位肽的篩選及其疫苗構(gòu)建.pdf

1、人淋巴細胞分化抗原CD20僅表達于正常以及95％以上的惡性B細胞表面，是細胞表面非糖基化疏水磷蛋白，分子量為33-37kD，起始表達于pre-B細胞階段，到B細胞終末分化成漿細胞時消失，是B細胞的標志性分子。CD20抗原在惡性B細胞表面具有穩(wěn)定表達、不脫落、不分泌的特性。該分子的第三和第四跨膜區(qū)之間，由43個氨基酸殘基組成的膜外區(qū)，構(gòu)成了其主要的抗原表位，可以使抗體最大限度地接近細胞膜。因此，CD20分子是惡性B細胞腫瘤治療最為理想的一

2、個靶抗原。1997年，針對B細胞CD20抗原研制的單克隆抗體Rituximab成為被FDA第一個批準用于B細胞淋巴瘤的治療，并在臨床應用中取得了良好的治療效果。但單抗治療的費用高、劑量大、需反復注射以及免疫原性反應極大的限制了單抗的臨床應用。因而，構(gòu)建針對CD20分子的治療性疫苗，刺激宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對腫瘤的特異性體液免疫反應并對該腫瘤抗原形成長期的免疫記憶，用主動免疫的方式克服單抗應用的不足具有良好的發(fā)展前景。 模擬表位疫苗

3、是近年來隨著噬菌體肽庫技術(shù)發(fā)展起來的一類疫苗，它可以在構(gòu)象上模擬天然抗原，誘導相應天然表位特異性的體液免疫反應。而且由于模擬表位分子小可以直接以化學合成的方式得到，與傳統(tǒng)疫苗以及基因工程產(chǎn)品相比它造價低、工藝簡單、質(zhì)量控制容易，具有工藝穩(wěn)定、無致瘤原性、無內(nèi)毒素、無感染源等優(yōu)點，因此是具有開發(fā)前景的一類疫苗。 本課題利用噬菌體隨機呈現(xiàn)肽庫篩選技術(shù)篩選獲得CD20分子的模擬表位肽QDKLTQWPKWLE，并以該表位為抗原構(gòu)建針對C

4、D20分子的治療性疫苗，以期為淋巴瘤以及其它B細胞相關(guān)性疾病的治療提供新的方向。篩選獲得的表位肽可以模擬CD20單克隆抗體Rituximab所識別表位的構(gòu)象，并且表達該表位的噬菌體可以競爭性抑制Rituximab與天然CD20分子的結(jié)合。以該表位為基礎(chǔ)通過原核表達、化學合成、化學偶聯(lián)方式構(gòu)建的五種蛋白疫苗中，以匙孔血藍蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)或破傷風類毒素(tetanustoxoid，TT)為載體蛋