多價小鼠精子抗原表位肽的構建及其避孕效應研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文多價小鼠精子抗原表位肽的構建及其避孕效應研究姓名：何畏申請學位級別：博士專業(yè)：泌尿外科（婦產(chǎn)科）指導教師：史常旭2002.5.1質譜儀分析證明其荷質比與理論一致；純化后，其純度大于9 5 ％；將新抗原與K L H 偶連后免疫小鼠，經(jīng)W e s t e m b l o t 證實其誘導的特異性抗體可識別小鼠、大鼠、人睪丸組織中分子量約為2 2 K D 和5 5 K D 左右的蛋白質。二、P 3 多肽與弗氏佐劑混懸后免

2、疫近交系B a l b ／C 小鼠后，在血清和陰道粘膜沖洗液中可檢測出特異性I g G 、I g A ，最高效價分別達到1 ：6 0 0 0和1 ：3 0 0 ：免疫后的小鼠脾臟淋巴細胞增殖率升高，淋巴細胞培養(yǎng)上清液中分泌的I L ．4 和I N F —Y 也升高，且以I L ．4 更明顯。提示P 3 多肽可刺激小鼠產(chǎn)生較強的機體全身免疫效應，并具有促進T h 2 型細胞極化的功能，有利于機體的體液免疫應答。三、P 3 多肽與弗氏佐劑混

3、懸后分別免疫B a l b ／C 和C 5 7 8 1 ／6 小鼠，結果B a l b ／C 雌鼠妊娠率平均降至6 1 ．1 ％，每胎產(chǎn)仔數(shù)降至4 ．3 只；C 5 7 8 1 ／6雌鼠的妊娠率及每胎產(chǎn)仔量降低更為顯著，分別為4 4 ．4 ％和4 ．1 只。初步證明以精子抗原表位肽為靶抗原的多肽疫苗P 3 具有顯著的免疫性避孕效應，且該作用可突破遺傳限制。四、免疫后小鼠的組織病理學觀察未發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟、腎臟的病理改變，卵巢的卵泡發(fā)育正常

4、，睪丸內精子數(shù)量多，無明顯的淋巴細胞浸潤。取免疫后小鼠及其分娩的子代鼠骨髓行微核實驗，結果與正常小鼠相比，實驗組P C E ，N c E 和微核率無明顯差別。五、在ⅣF 條件下，特異性P 3 抗血清可顯著抑制小鼠精子與去透明帶卵子間的相互作用，包括精卵結合與融合；新抗原P 3 多肽主要定位于小鼠精予的頭部頂體膜區(qū)域；與抗血清孵育后的精子超微結構無明顯改變。六、將P 3 多肽與脂類、Q u i A 以一定比例混合后，成功地制備了新型免疫刺

5、激復合物I S C O M s ，并在電鏡下觀察到明顯的蜂巢樣結構，多肽嵌入率測定提示多肽含量為0 ．2 6 m g ／m l 。多肽- I S C O M s 復合物免疫C 5 7 8 1 ／6小鼠后顯示出強大的刺激效應：血清和陰道粘膜中的特異性抗體滴度迅速升高，并持續(xù)較長時間；小鼠的受孕率顯著減低至1 4 ．3 ％，3 月后升至2 0 ％。提示I S C O M s 應用于避孕疫苗研究領域具有廣闊的前景。y關鍵詞： 精子抗原合成肽