母血游離胎兒DNA在21-三體、18-三體產(chǎn)前篩查的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　 采用大規(guī)模前瞻性研究設(shè)計(jì)評(píng)價(jià)第二代測(cè)序技術(shù)對(duì)母血漿中游離胎兒DNA(cell-freefetalDNA，cffDNA)進(jìn)行無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體檢測(cè)的靈敏度和特異性。比較傳統(tǒng)血三聯(lián)篩查與第二代測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于孕中期產(chǎn)前篩查的檢測(cè)效率，評(píng)價(jià)第二代測(cè)序技術(shù)對(duì)母血漿中游離胎兒DNA進(jìn)行無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體篩查效率及臨床可行性。
　　 材料與方法：
　　 采用嚴(yán)格的前瞻性雙盲試驗(yàn)設(shè)計(jì)，收集2011年4月-2011年

2、10月于北京協(xié)和醫(yī)院、海淀區(qū)婦幼保健院就診，且滿足≥孕11周，單胎妊娠，孕婦本人不是染色體異常患者，且孕婦在抽血當(dāng)天無(wú)侵入性手術(shù)經(jīng)歷，孕婦無(wú)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療等經(jīng)歷的孕婦外周血，應(yīng)用12-plex高通量Hiseq2000平臺(tái)進(jìn)行試驗(yàn)，將測(cè)得的序列與人的參考基因組比對(duì)并作統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各個(gè)染色體Z值，檢測(cè)胎兒染色體非整倍體異常；同時(shí)對(duì)低齡孕婦進(jìn)行中孕期血清學(xué)篩查。對(duì)血清學(xué)篩查陽(yáng)性或者cffDNA檢測(cè)陽(yáng)性者在知情同意基礎(chǔ)上進(jìn)行細(xì)

3、胞遺傳學(xué)診斷；高齡孕婦全部進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)診斷，胎兒核型分析作為陽(yáng)性樣本檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)血清學(xué)篩查陰性與cffDNA檢測(cè)陰性者，隨訪至胎兒出生后。
　　 結(jié)果：
　　 1、本次共收入2236例孕婦，全部為單胎妊娠，其中妊娠結(jié)局隨訪數(shù)據(jù)失訪138
　　 例(6.2％);cffDNA檢測(cè)試驗(yàn)失敗84例(3.8%)，其中74例有隨訪數(shù)據(jù)。有效樣本數(shù)2024例。
　　 2、中孕期血清學(xué)篩查1741例，篩查高危共249

4、例，占14.3%(249/1741)。其中21三體(Down'sSyndrome，DS)高危246例，18三體高危3例。
　　 3、cffDNA檢測(cè)收集樣本2236例，結(jié)果報(bào)告2152例，實(shí)驗(yàn)失敗84例(3.8%)。cffDNA檢測(cè)檢出22例陽(yáng)性：12例DS，1例T13，6例T18，2例XO，1例XXY，綜合陽(yáng)性率1.02%(22/2152)。
　　 4、隨訪到妊娠結(jié)局2098例，隨訪率為93.8%。行侵入性產(chǎn)前診斷43

5、2例，發(fā)現(xiàn)有臨床意義的染色體異常共29例，均行引產(chǎn)，其中13例DS，1例T13,5例T18,5例45，X（其中一例為嵌合型），1例47，XXY。主動(dòng)引產(chǎn)3例；發(fā)現(xiàn)胎兒多發(fā)畸形共19例，以泌尿系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)異常多見(jiàn)；不良妊娠結(jié)局10例，為胎死宮內(nèi)、晚期難免流產(chǎn)，胎兒外觀均未見(jiàn)異常。
　　 5、cffDNA檢測(cè)檢出1例T18假陽(yáng)性，1例XXY假陽(yáng)性；漏診1例T21,2例45，X（其中1例試驗(yàn)失?。?，1例XXY。
　　 6、

6、cffDNA檢測(cè)與傳統(tǒng)血清學(xué)篩查針對(duì)21、18、13號(hào)染色體檢測(cè)，總的假陽(yáng)性率分別為0.05%(1/2005)、14.05%(243/1730)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值94.74%(18/19)、2.41%(6/249)，檢出率94.74%(18/19)、54.55%(6/11)。
　　 7、cffDNA檢測(cè)與傳統(tǒng)血清學(xué)篩查針對(duì)21、18、13、X、Y染色體檢測(cè)，總的假陽(yáng)性率0.10%(2/2000)、14.08%(243/1726)，陽(yáng)性

7、預(yù)測(cè)值90.91%(20/22)、2.41%(6/249)，檢出率83.33%(20/24)、40%(6/15).
　　 8、cffDNA檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)DS的靈敏度為92.3%(12/13)，特異度為100%(2011/2011)；檢測(cè)18、13三體綜合癥的靈敏度分別100%(5/5)、100%(1/1)，特異度為99.95%(2018/2019)、100%(2023/2023)，檢測(cè)XO、XXY靈敏度較低，特異度分別為100%(

8、2020/2020)、99.95%(2022/2023)。
　　 9、18例IVF妊娠（全部為單胎），占0.9%(18/2236)。其中1例核型為46，XY，-21，+21rob(21;21)，inv(9)，cffDNA檢測(cè)結(jié)果T21，余17例二者均未發(fā)現(xiàn)異常。
　　 結(jié)論：
　　 1、cffDNA產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)常見(jiàn)染色體非整倍體異常T21、T18假陽(yáng)性率低、檢出率高，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較高，初步證明了cffDNA檢測(cè)