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1、目的:研究腹腔注射谷氨酰胺對(duì)大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷中Brn3a表達(dá)的影響。
方法:健康清潔型Wistar大鼠55只隨機(jī)分為三組,正常對(duì)照組5只,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組25只、實(shí)驗(yàn)組25只。正常對(duì)照組不做任何處理,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中所有大鼠玻璃體腔注射2μl80mmol/1 NMDA制作視網(wǎng)膜興奮性損傷模型,實(shí)驗(yàn)組在大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型制作7h后腹腔注射谷氨酰胺(0.75 g/kg)。實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組分別在造模后8h、12h、16
2、h、24h、48h各隨機(jī)處死5只大鼠,正常對(duì)照組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)處死一只。HE染色光鏡下觀察各組視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)視網(wǎng)膜Brn3a表達(dá)的變化。
結(jié)果:HE染色顯示正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)層次清楚,染色均勻,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則。實(shí)驗(yàn)各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列紊亂,胞漿內(nèi)空泡樣變性,視網(wǎng)膜組織變薄,隨時(shí)間延長(zhǎng)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目逐漸減少。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)
3、各組Brn3a mRNA均較正常組減少;造模后12h、16h、24h、48h,實(shí)驗(yàn)組Brn3a mRNA均高于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;造模后8h,實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組Brn3a mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示Brn3a只在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá),陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及光密度值測(cè)定結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果相吻合。
結(jié)論:1.成功建立大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型;
2.NMDA可致大鼠視網(wǎng)膜中B
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