霍亂腸毒素B亞單位在轉(zhuǎn)基因番茄果實中特異性表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究利用植物DNA重組技術(shù),培育出只在番茄果實中特異、高效表達霍亂毒素B亞單位(CTB)的植物口服疫苗,為霍亂弧菌植物口服疫苗的應(yīng)用研究及市場化提供實驗基礎(chǔ).首先,我們通過酶切、PCR等方法分別獲取目的基因CTB和番茄果實特異性啟動子——E8啟動子基因片段,利用質(zhì)粒pBlueScript(+) SK、T載體和PBI121上的酶切位點,構(gòu)建啟動子為E8的植物雙元表達載體Pe8-CTB,以凍融法將其轉(zhuǎn)至根癌農(nóng)桿菌LBA4404中.再通過正

2、交設(shè)計實驗,以番茄子葉為外植體,對所選用的番茄品種、子葉苗齡、植物激素濃度和培養(yǎng)溫度等條件進行優(yōu)化.在高效再生系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化農(nóng)桿菌稀釋濃度、浸染時間和轉(zhuǎn)化方式等條件.在此條件下,將CTB基因通過農(nóng)桿菌浸染法對番茄細(xì)胞進行轉(zhuǎn)化,篩選到30株抗性番茄幼芽.對這些抗性芽作伸長、生根誘導(dǎo)培養(yǎng),其中28株長成番茄植物并開花結(jié)果.對植物基因組DNA的PCR、dot blot和Southern印跡雜交,證實所獲得的26株抗性植株中14株有CTB整

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