轉(zhuǎn)基因油菜衰老特異性表達(dá)病程相關(guān)基因CH5B和HvOxOh的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、油菜是世界上重要的油料作物之一。是食用油的重要來源.菌核病是油菜中很流行的腐生性病害，它由核盤菌(Sclerotiniasclerotiorum)感染所致，它主要在油菜生長的成熟期發(fā)作，嚴(yán)重影響油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)。已有的研究表明，目前暫沒有發(fā)現(xiàn)抗菌核病的油菜品種，品種之間只有耐性的不同，油菜本身沒有抗性的資源，這一局限成為了油菜抗菌核病育種的瓶頸。然而，轉(zhuǎn)基因技術(shù)為油菜抗病育種帶來了新的契機(jī)。 針對油菜菌核病的發(fā)病特點，本研究采用

2、了在油菜中衰老特異表達(dá)病程相關(guān)基因-幾丁質(zhì)酶編碼基因CH5B和大麥草酸氧化酶HvOxOh，來提高油菜的抗病性。表達(dá)載體SAG12:CH5B、SAG12:HvOxOh和35S:CH5B被用來轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜品種Westar10，本實驗研究了轉(zhuǎn)化過程中影響轉(zhuǎn)化的限制性因素，包括外植體苗齡大小、共培養(yǎng)時間、激素濃度和抗生素濃度。研究表明：4d苗齡的外植體最適合轉(zhuǎn)化；共培養(yǎng)2d時間較為合適；4mg/L的6-BAP影響外植體的分化；500mg/L的

3、羧芐青霉素限制外植體的生長。 分別得到了13株轉(zhuǎn)化SAG12:CH5B、5株轉(zhuǎn)化SAG12:HvOxOh和14株轉(zhuǎn)化35S:CH5B的轉(zhuǎn)基因植株.對部分轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了Southern雜交分析，結(jié)果證明外源基因已經(jīng)插入到了轉(zhuǎn)基因植株基因組中。RT-PCR和Northern雜交分析了外源基因在RNA水平上的表達(dá)，證實了外源基因在轉(zhuǎn)化SAG12:CH5B和SAG12:HvOxOh的轉(zhuǎn)基因植株中衰老時期特異表達(dá).對幾丁質(zhì)酶活性和草酸氧

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