腦區(qū)特異性表達(dá)rtTA轉(zhuǎn)基因鼠的構(gòu)建及初步應(yīng)用.pdf

1、調(diào)控轉(zhuǎn)基因在發(fā)育的特定階段和特定組織中進(jìn)行表達(dá)可以更加精確的研究某一基因產(chǎn)物的功能，同時(shí)這種可調(diào)控性既可以避免傳統(tǒng)不可調(diào)控轉(zhuǎn)基因在胚胎發(fā)育中早期表達(dá)的毒性作用或致死作用而阻礙對表型的分析，又可以避免基因過度表達(dá)而造成難于分析的復(fù)雜的多表型。四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)由于可以嚴(yán)密高效的調(diào)控轉(zhuǎn)基因的表達(dá)，而從眾多的調(diào)控系統(tǒng)中脫穎而出，被廣泛應(yīng)用于各個(gè)生物學(xué)領(lǐng)域，并已成功應(yīng)用于人工調(diào)控轉(zhuǎn)基因小鼠中外源基因的表達(dá)。 本研究即是應(yīng)用四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)中

2、的Tet-on系統(tǒng)，將其反式激活子rtTA用分子生物學(xué)方法克隆到僅在前腦特異性表達(dá)的鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶α亞基啟動子序列之后，構(gòu)建p279-rtTA重組質(zhì)粒。通過對FVB小鼠受精胚胎的雄原核顯微注射，獲得陽性轉(zhuǎn)基因小鼠，以此構(gòu)建腦區(qū)特異性表達(dá)rtTA的工具小鼠模型。此小鼠模型建立之后，與本室已構(gòu)建的pTRE—SV40Tag轉(zhuǎn)基因小鼠，即Tet-on系統(tǒng)中反應(yīng)組分轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，得到雙陽性轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)檢測SV40Tag在前腦

3、表達(dá)情況，由此來驗(yàn)證該模型工具鼠的誘導(dǎo)效率。 實(shí)驗(yàn)中注射移植后出生原代小鼠179只，經(jīng)PCR和Southern檢測得到p279-rtTA陽性小鼠3只(1♂2♀)。F1代陽性小鼠腦組織中檢測到rtTA的表達(dá)，其它臟器中未檢測到。通過飲水添加Dox(2mg/ml)及5％蔗糖進(jìn)行誘導(dǎo)的雜交雙陽性小鼠腦及各臟器組織中未檢測到SV40Tag的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，此四環(huán)素調(diào)控組分的轉(zhuǎn)基因工具鼠的構(gòu)建是成功的，它可以為將來細(xì)致研究其他腦瘤相