腦區(qū)特異性表達rtTA轉基因鼠的構建及初步應用.pdf

1、調控轉基因在發(fā)育的特定階段和特定組織中進行表達可以更加精確的研究某一基因產物的功能，同時這種可調控性既可以避免傳統(tǒng)不可調控轉基因在胚胎發(fā)育中早期表達的毒性作用或致死作用而阻礙對表型的分析，又可以避免基因過度表達而造成難于分析的復雜的多表型。四環(huán)素調控系統(tǒng)由于可以嚴密高效的調控轉基因的表達，而從眾多的調控系統(tǒng)中脫穎而出，被廣泛應用于各個生物學領域，并已成功應用于人工調控轉基因小鼠中外源基因的表達。 本研究即是應用四環(huán)素調控系統(tǒng)中

2、的Tet-on系統(tǒng)，將其反式激活子rtTA用分子生物學方法克隆到僅在前腦特異性表達的鈣調蛋白依賴性蛋白激酶α亞基啟動子序列之后，構建p279-rtTA重組質粒。通過對FVB小鼠受精胚胎的雄原核顯微注射，獲得陽性轉基因小鼠，以此構建腦區(qū)特異性表達rtTA的工具小鼠模型。此小鼠模型建立之后，與本室已構建的pTRE—SV40Tag轉基因小鼠，即Tet-on系統(tǒng)中反應組分轉基因小鼠雜交，得到雙陽性轉基因小鼠經強力霉素誘導檢測SV40Tag在前腦

3、表達情況，由此來驗證該模型工具鼠的誘導效率。 實驗中注射移植后出生原代小鼠179只，經PCR和Southern檢測得到p279-rtTA陽性小鼠3只(1♂2♀)。F1代陽性小鼠腦組織中檢測到rtTA的表達，其它臟器中未檢測到。通過飲水添加Dox(2mg/ml)及5％蔗糖進行誘導的雜交雙陽性小鼠腦及各臟器組織中未檢測到SV40Tag的表達。實驗結果顯示，此四環(huán)素調控組分的轉基因工具鼠的構建是成功的，它可以為將來細致研究其他腦瘤相