骨髓間充質(zhì)干細胞的定向與共培養(yǎng)體系誘導.pdf

1、目的:通過骨髓間充質(zhì)干細胞的定向誘導，探討其成脂、成神經(jīng)等多分化潛能。利用共培養(yǎng)體系誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向胰島祖細胞的初步轉化，探討骨髓間充質(zhì)干細胞在糖尿病治療領域的價值。 方法:骨髓間充質(zhì)干細胞來源于5～10歲兒童胸骨骨髓血(排除造血系統(tǒng)疾病，經(jīng)得家屬同意)。Percoll淋巴細胞分層液分離骨髓間充質(zhì)干細胞；第3代細胞經(jīng)CD44抗體、CD45抗體、CD34抗體鑒定；第4代細胞采用含10<'-8>mmol/L地塞米松、10μg/

2、L胰島素的高糖DMEM(H-DMEM)誘導其向脂肪細胞分化，油紅O染色鑒定脂肪細胞。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)誘導其向神經(jīng)祖細胞分化，經(jīng)巢蛋白鑒定，繼以1％二甲基亞礬(DMSO)的無血清H-DMEM誘導其形成神經(jīng)網(wǎng)格樣結構。 膠原酶消化法獲取流產(chǎn)胎兒胰腺間充質(zhì)細胞，用添加bFGF的無血清低糖DMEM(L-DMEM)使其增殖，然后將胰腺間充質(zhì)細胞接種于底層已接種骨髓間充質(zhì)干細胞的Transwell內(nèi)板(insert)，共培

3、養(yǎng)法誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向胰島祖細胞的初步轉化。 建立骨髓間充質(zhì)干細胞和神經(jīng)干細胞共培養(yǎng)體系誘導神經(jīng)干細胞分化為神經(jīng)元。 結果:骨髓間充質(zhì)干細胞體外經(jīng)誘導可分化為脂肪細胞及神經(jīng)細胞。胎兒胰腺間充質(zhì)細胞中具有巢蛋白、CK-19陽性的胰腺干細胞，體外可分化形成胰島樣細胞團。共培養(yǎng)法可誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化為PDX-1免疫反應陽性細胞。共培養(yǎng)體系能促進神經(jīng)干細胞的分化。 結論: Percoll淋巴細胞分離液分離可獲取