年輕骨髓間充質(zhì)干細胞可通過細胞融合改善年老骨髓間充質(zhì)干細胞功能.pdf

1、研究背景及目的：
　　 骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）對間充質(zhì)組織功能的維持和修復(fù)起重要作用。干細胞的減少可能導(dǎo)致腦、肝臟、皮膚、骨骼等相關(guān)退行性疾病的發(fā)生。小鼠BMSC隨年齡增加，多種細胞功能發(fā)生改變，包括細胞集落形成單位功能下降，成骨細胞、脂肪細胞以及成軟骨細胞分化能力下降，細胞增殖能力下降，細胞端粒酶活性下降，端粒長度縮短。最近的研究表明細胞融合作為一種有效

2、的再調(diào)控細胞功能的方法，得到廣泛關(guān)注。有研究表明骨髓間充質(zhì)干細胞可與小腸干細胞、肝臟細胞、心肌細胞等細胞融合并改變其功能。本文的研究目的是誘導(dǎo)年輕與年老小鼠BMSC融合，探討融合后年輕BMSC對年老BMSC功能的影響。
　　 研究方法：
　　 年輕(2-3月齡)及年老(18-24月齡) C57BL/6 小鼠BMSC在紅色熒光染料PKH26標記后分別與年輕及年老綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠BMSC通過聚乙烯二醇 (

3、PEG 1500)誘導(dǎo)，建立細胞融合模型。通過流式細胞儀鑒定細胞融合率和細胞表面特異性抗原的表達。免疫熒光顯微鏡觀察融合細胞形態(tài)及細胞核特性。通過細胞計數(shù)比較5組細胞(年輕組Y，年老組O，年輕融合組Y-Y，年輕年老融合組Y-O,年老融合組O-O) 在2d、4d、6d、8d的細胞增殖能力。誘導(dǎo)細胞向成骨細胞及脂肪細胞分化，比較5組細胞的分化能力。
　　 結(jié)果：
　　 通過PEG誘導(dǎo)，可獲得30.45％±4.13％的融合細胞

4、，3組不同年齡融合組的細胞融合率無統(tǒng)計學(xué)差異，具體數(shù)值為 (29.41％±3.00％ vs.30.54％±1.20％ vs.31.41％±6.63％)，P>0.05。融合細胞表達間充質(zhì)干細胞表面特異性抗原CD44、Sca-1，而不表達造血干細胞表面特異性抗原CD34、CD117、CD31、CD45。在2d、4d、6d、8d，Y-O組細胞數(shù)量增加百分率比O-O組均顯著增高，具體數(shù)值為 (122.2％±4.6％) vs.(104.64％±1

5、.25％)；(213.25％±15.29％) vs.(130.02％±6.82％)；(318.46％±19.86％) vs.(179.4％±9.54％)；(439.98％±24.09％) vs.(240.03％±28.07％)；P<0.05。代表成骨細胞分化能力強弱的茜素紅染色陽性率和代表脂肪細胞分化能力強弱的油紅O染色陽性率，Y-O組比O-O組均顯著增高，具體數(shù)值分別為(25.46％±1.52％)vs.(13.85％±1.69％)，P