結合分枝桿菌H-,37-Rv甲硫氨酸氨肽酶基因的克隆表達以及酶學性質的研究.pdf

1、結核病是目前全球范圍內由單一微生物感染引起死亡率最高的傳染病。不斷出現(xiàn)的結核桿菌耐藥菌株、缺乏普遍有效的疫苗、以及在世界各地持續(xù)增加的艾滋病病毒HIV(HumanImmunodeficiencyVirus)雙重感染病人的出現(xiàn)，使結核病的控制變得越來越困難。尋找新的抗結核基因藥靶，研發(fā)新型抗結核藥物，特別是可以抑制持續(xù)感染過程中的結核桿菌的有效藥物是當前抗結核研究的重要課題之一。 一般來說，在真核生物中至少有兩種MetAP的異構形

2、式，而在原核生物中單一的復制基因就足夠細胞完成正常的生理功能。在結核分支桿菌H37Rv菌株中，有兩個開放閱讀框(Rv0734和Rv2861c)與map基因有高度的同源性。相似于大腸桿菌甲硫氨酸氨肽酶的EcMetAP(Ia型)Rv0734編碼的蛋白僅含有一個催化功能區(qū)，而相似于哺乳動物的MetAPs(Ib型)Rv2861c編碼的蛋白不僅缺少了兩個Zn指區(qū)域，而且在N端延伸大約40個氨基酸。由于結核分支桿菌MetAPs(MtMetAPs)和

3、人類的MetAPⅠ(hMetAPⅠ)同源性很低，也就意味著它們有可能成為抗持續(xù)感染的結核分支桿菌新型藥物的良好靶標。 我們以結核分支桿菌H37Rv基因組為模板，擴增該菌株的甲硫氨酸氨肽酶基因mapA、mapB，并將其克隆入原核表達載體PET-28a(+)中，通過在大腸桿菌BL21中表達，以鎳離子螯合型瓊脂糖凝膠親和層析柱純化，獲得了純化的可溶性結核分支桿菌H37Rv的重組甲硫氨酸氨肽酶蛋白，并對其結構以及酶學性質進行了研究，通過