NO-cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖機(jī)制研究.pdf

1、目的：星形膠質(zhì)細(xì)胞(Ast)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中數(shù)量最多的細(xì)胞，具有多方面的功能。Ast活化是指數(shù)量增加，膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)增強(qiáng)，并分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子等，對(duì)神經(jīng)元的存活、突起的再生和神經(jīng)系統(tǒng)功能的恢復(fù)有重要的影響。如何有效調(diào)控膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖，是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)旨在經(jīng)體外分離、培養(yǎng)純化獲得的高純度新生鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞，利用中藥丹參的主要成分丹參酮IIA進(jìn)行干預(yù)，觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞活化

2、增殖情況。用不同的藥物，調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞中cGMP濃度，觀察相應(yīng)的GFAP表達(dá)強(qiáng)度，研究星形膠質(zhì)細(xì)胞cGMP與GFAP增殖的相互關(guān)系，探討NO-sGC-cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖機(jī)制。 方法：分離2天內(nèi)新生SD大鼠大腦皮層細(xì)胞，用含20％新生牛血清的DMEM/F 12的培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)，并以GFAP-FITC免疫熒光法對(duì)所獲細(xì)胞進(jìn)行鑒定。待傳代培養(yǎng)生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)良好時(shí)，一部分隨機(jī)分成4組，在不同時(shí)間段給予不

3、同濃度丹參酮IIA進(jìn)行干預(yù)，經(jīng)流式細(xì)胞儀觀察其增殖情況，另一部分隨機(jī)分成8組，經(jīng)相應(yīng)藥物(ODQ、IBMX)干預(yù)后，放射免疫測(cè)其cGMP濃度，同時(shí)免疫熒光測(cè)GFAP熒光強(qiáng)度OD值，代表GFAP表達(dá)強(qiáng)度，統(tǒng)計(jì)學(xué)作相關(guān)分析。 結(jié)果：原代及傳代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)GFAP免疫熒光檢測(cè)，其純度可達(dá)96％以上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在一定的范圍內(nèi)，隨著丹參酮IIA濃度增加，處于G0/G1期細(xì)胞比例下降，S+G2+M期的比例相應(yīng)增加。不同濃度非特異

4、性磷酸二酷酶抑制劑IBMX抑制了cGMP的降解，使cGMP濃度增加，GFAP隨著不同濃度IBMX變化表達(dá)量也不同，相關(guān)系數(shù)為0.95。用sGC選擇性抑制劑ODQ干預(yù)后，隨著cGMP濃度降低，GFAP表達(dá)量也隨之降低，其相關(guān)系數(shù)為0.76。 結(jié)論： 1.丹參酮IIA可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化。 2.cGMP濃度與GFAP合成呈高度正相關(guān)。結(jié)合NO-GC-cGMP信號(hào)傳導(dǎo)途徑，該途徑可能對(duì)GFAP的合成具有調(diào)節(jié)作用。