載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞載藥體系的建立及其體外評(píng)價(jià).pdf

1、背景:
　　長(zhǎng)春瑞濱是一種半合成的長(zhǎng)春花生物堿類抗腫瘤藥，是晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC，non-small cell lung cancer)的一線治療藥物，也廣泛地用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、難治性淋巴瘤、卵巢癌及頭頸部腫瘤的治療。臨床主要?jiǎng)┝肯拗菩远拘詾楣撬枰种?、胃腸道反應(yīng)、外周神經(jīng)毒性及靜脈毒性，其中靜脈毒性最為值得引起注意。將抗腫瘤藥物通過(guò)載體靶向運(yùn)送至腫瘤組織后再釋放，是降低藥物毒副作用、減少用藥劑量、增強(qiáng)藥物在局部藥效的有效辦

2、法。紅細(xì)胞作為藥物載體具有良好的生物相容性、生物可降解性、體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)、資源豐富、易獲得、極大變性能力等優(yōu)勢(shì)。為了充分利用紅細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)減少長(zhǎng)春瑞濱的靜脈毒性并提高藥物療效，擬建立載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞載藥體系并評(píng)價(jià)其功能。
　　目的:
　　1、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞載藥體系的建立:改良已有的建立載體紅細(xì)胞載藥體系的方法包載長(zhǎng)春瑞濱，并通過(guò)計(jì)算載體紅細(xì)胞載藥率探索載體紅細(xì)胞包載長(zhǎng)春瑞濱的最佳載藥條件。
　　2、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)

3、胞載藥體系的體外評(píng)價(jià):評(píng)價(jià)載藥過(guò)程對(duì)載體紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能以及紅細(xì)胞形態(tài)的影響;評(píng)價(jià)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞在體外低溫貯存的穩(wěn)定性;評(píng)價(jià)載體紅細(xì)胞對(duì)包載的長(zhǎng)春瑞濱的緩釋能力。
　　3、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞抗腫瘤作用的評(píng)價(jià):以裸藥長(zhǎng)春瑞濱作為對(duì)照，用人肺腺癌細(xì)胞株A549評(píng)價(jià)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的抗腫瘤作用。
　　方法:
　　1、用改良低滲預(yù)膨脹技術(shù)來(lái)建立載長(zhǎng)春瑞濱的紅細(xì)胞載藥體系，包載過(guò)程中設(shè)定不同的長(zhǎng)春瑞濱濃度、預(yù)膨脹紅細(xì)胞與藥物作

4、用時(shí)間，通過(guò)計(jì)算載體紅細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春瑞濱包載率來(lái)尋找最佳載藥條件。
　　2、通過(guò)對(duì)比紅細(xì)胞載藥前后的形態(tài)變化及紅細(xì)胞膜滲透脆性變化來(lái)評(píng)價(jià)載藥過(guò)程對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)、紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的影響。將含有載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的PBS懸液置于4℃環(huán)境中，每天肉眼觀察上清液顏色，并檢測(cè)上清液中長(zhǎng)春瑞濱的藥物濃度，同時(shí)鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)，評(píng)價(jià)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的貯存穩(wěn)定性。將含有載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的PBS懸液置于37℃環(huán)境中，每間隔一定時(shí)間檢測(cè)上清液及載藥紅細(xì)胞

5、中長(zhǎng)春瑞濱的藥物濃度，繪制“時(shí)間-藥物濃度”曲線，觀察載體紅細(xì)胞對(duì)包載的長(zhǎng)春瑞濱的釋放情況。
　　3、用MTT法評(píng)價(jià)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制作用。將不同濃度的裸藥長(zhǎng)春瑞濱作用于人肺腺癌細(xì)胞株A549，作用24小時(shí)及48小時(shí)后測(cè)定OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，對(duì)比同等長(zhǎng)春瑞濱濃度的載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞作用于A549細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后的細(xì)胞增殖抑制率。
　　結(jié)果:
　　1、用改良低滲預(yù)膨脹技術(shù)來(lái)建立載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞載

6、藥體系，當(dāng)長(zhǎng)春瑞濱濃度為0.25mg/mL，長(zhǎng)春瑞濱溶液與預(yù)膨脹紅細(xì)胞作用時(shí)間為20min時(shí)能獲得的最大載藥率約為70.92％。
　　2、高倍鏡下觀察包載長(zhǎng)春瑞濱前后載體紅細(xì)胞的形態(tài)，紅細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。將含有載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞的PBS懸液置于4℃環(huán)境中，5天內(nèi)肉眼觀察上清無(wú)明顯溶血現(xiàn)象出現(xiàn)，且上清長(zhǎng)春瑞濱濃度測(cè)不出。對(duì)比洗滌紅細(xì)胞、空載紅細(xì)胞以及載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞，載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞膜滲透脆性增加，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)

7、。載體紅細(xì)胞對(duì)包載的長(zhǎng)春瑞濱能穩(wěn)定釋放，48小時(shí)左右釋放率接近100％。
　　3、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞作用于A549細(xì)胞24小時(shí)后，僅當(dāng)長(zhǎng)春瑞濱濃度為0.025mg/ml時(shí)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖抑制率強(qiáng)于同等濃度裸藥長(zhǎng)春瑞濱，但兩者差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。作用48小時(shí)后，當(dāng)長(zhǎng)春瑞濱濃度為0.0125、0.025mg/ml時(shí)載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖抑制率均強(qiáng)于裸藥長(zhǎng)春瑞濱(P＜0.05)，且產(chǎn)生相同抑制率時(shí)，載長(zhǎng)春瑞

8、濱紅細(xì)胞所需要的長(zhǎng)春瑞濱劑量低于裸藥長(zhǎng)春瑞濱。
　　結(jié)論:
　　1、改良低滲預(yù)膨脹技術(shù)能建立載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞載藥體系，包載率能達(dá)到70.92％左右。包載過(guò)程對(duì)載體紅細(xì)胞形態(tài)、紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能無(wú)明顯影響。
　　2、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞能在4℃環(huán)境中穩(wěn)定保存5天。載體紅細(xì)胞能在37℃環(huán)境中緩慢釋放包載的長(zhǎng)春瑞濱，48小時(shí)左右釋放率接近100％。
　　3、載長(zhǎng)春瑞濱紅細(xì)胞在體外對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549有持續(xù)抗腫瘤作用，且