負(fù)載吉西他濱的紅細(xì)胞載藥系統(tǒng)的建立及體外抗腫瘤作用評(píng)價(jià).pdf

1、研究背景:
　　將抗腫瘤藥物通過(guò)載體靶向運(yùn)送至腫瘤組織后再釋放，是降低藥物毒副作用，減少用藥劑量，增強(qiáng)藥物在局部藥效的有效辦法。自體血液中分離的紅細(xì)胞有作為藥物載體的潛能，具有較好的安全性、有效性和易耐受性。吉西他濱（2'-脫氧-2'，2'-二氟胞苷），是一種臨床廣泛使用的經(jīng)典化療藥物，常應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、膀胱癌、卵巢癌和甲狀腺癌等的治療，尤其在局部晚期或轉(zhuǎn)移性胰腺癌、膀胱癌中。但是，其在臨床使用過(guò)程

2、中，仍具有生物利用度低、毒副反應(yīng)明顯，易產(chǎn)生獲得性耐藥等局限性。
　　研究目的:
　　1、改良已有建立載體紅細(xì)胞的方法，通過(guò)計(jì)算載藥率尋找用載體紅細(xì)胞包載吉西他濱的最佳載藥條件。
　　2、評(píng)價(jià)載藥過(guò)程對(duì)載體紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的影響;評(píng)價(jià)載吉西他濱紅細(xì)胞在體外低溫貯存的穩(wěn)定性;評(píng)價(jià)載體紅細(xì)胞對(duì)包載的吉西他濱的緩釋能力。
　　3、以裸藥吉西他濱作為對(duì)照組，用人肺腺癌細(xì)胞株A549及人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3評(píng)價(jià)載吉西

3、他濱紅細(xì)胞的抗腫瘤作用。
　　研究方法:
　　1、用低滲膨脹-高滲再封技術(shù)來(lái)建立負(fù)載吉西他濱的紅細(xì)胞載藥系統(tǒng)，包載過(guò)程中設(shè)定不同的吉西他濱濃度及再封時(shí)間，通過(guò)用2種方法計(jì)算載體紅細(xì)胞對(duì)吉西他濱包載率來(lái)尋找最佳載藥條件。
　　2、通過(guò)對(duì)比紅細(xì)胞載藥前后的形態(tài)變化及滲透脆性變化來(lái)評(píng)價(jià)載藥過(guò)程對(duì)紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的影響。將載吉西他濱紅細(xì)胞的PBS懸液置于4℃環(huán)境中，每天檢測(cè)上清液中吉西他濱的藥物濃度，同時(shí)觀察紅細(xì)胞形態(tài)，評(píng)價(jià)

4、載吉西他濱紅細(xì)胞的貯存穩(wěn)定性。將載吉西他濱紅細(xì)胞置于透析袋中，放置在37℃的PBS液中，每間隔一定時(shí)間檢測(cè)透析袋外液中吉西他濱的藥物濃度，繪制“時(shí)間-藥物濃度”曲線，觀察載體紅細(xì)胞對(duì)包載的吉西他濱的釋放情況。
　　3、用MTT法評(píng)價(jià)載吉西他濱紅細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制作用。將不同吉西他濱濃度的載吉西他濱紅細(xì)胞作用于人肺腺癌細(xì)胞株A549及人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3，作用24小時(shí)及48小時(shí)后測(cè)定OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，對(duì)比同等濃度裸藥

5、吉西他濱作用于A549及BxPC-3細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后的細(xì)胞增殖抑制率。
　　研究結(jié)果:
　　1、用低滲膨脹-高滲再封的技術(shù)建立負(fù)載吉西他濱的紅細(xì)胞載藥系統(tǒng)，能獲得的最大載藥率約為73.8％。
　　2、高倍鏡下觀察載吉西他濱前后載體紅細(xì)胞的瑞氏染色血細(xì)胞涂片，紅細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化，對(duì)比載吉西他濱前后載體紅細(xì)胞的滲透脆性曲線無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。載體紅細(xì)胞對(duì)包載的吉西他濱能穩(wěn)定釋放，48小時(shí)后釋放率接近100％。
　

6、　3、載吉西他濱紅細(xì)胞作用于A549細(xì)胞24小時(shí)后對(duì)比裸藥吉西他濱組，僅在吉西他濱濃度為780ng/ml時(shí)，載吉西他濱紅細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制作用強(qiáng)于裸藥吉西他濱(P＞0.05);作用48小時(shí)后載吉西他濱紅細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用較裸藥吉西他濱的優(yōu)勢(shì)進(jìn)一步增加，尤其在吉西他濱濃度為780ng/ml時(shí)，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。載吉西他濱紅細(xì)胞作用于BxPC-3細(xì)胞24小時(shí)后對(duì)比裸藥吉西他濱組，載吉西他濱紅細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制作用稍

7、強(qiáng)于裸藥吉西他濱;作用48h后載吉西他濱紅細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用較裸藥吉西他濱的優(yōu)勢(shì)進(jìn)一步增加，尤其在吉西他濱濃度為0.78ng/ml時(shí)(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　1、低滲膨脹-高滲再封技術(shù)能建立負(fù)載吉西他濱的紅細(xì)胞載藥系統(tǒng)，包載率能達(dá)到73.8％左右。包載過(guò)程對(duì)載體紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能的影響無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、載吉西他濱紅細(xì)胞能在4℃環(huán)境中穩(wěn)定保存至少7天。載體紅細(xì)胞能在37℃環(huán)境中緩慢釋放包載